專利名稱：鉤藤總生物堿的制備方法
技術領域：
本發明涉及藥用植物有效部位提取和分離方法領域，具體來說是涉及一種鉤藤總生物堿的制備方法。
背景技術：
鉤藤(Uncaria rhyncchophylla(Miq. ) Jacks)為菌草科植物，以帶鉤莖枝入藥，傳統醫學認為其具有清熱平肝，熄風定驚之功效，用于小兒癲癇及成人血壓偏高，頭暈目眩等。現代研究證明，鉤藤總生物堿對降低血壓、抗血小板聚集、抑制心肌收縮力等方面作用明顯。隨著鉤藤總生物堿的藥理作用的研究深入，其提取方法也越來越受到人們的重視。目前文獻中提取方法主要是大孔樹脂法和離子交換樹脂法。如中國專利200710098441. X，公開了一種從中藥鉤藤提取液中分離鉤藤總生物堿的方法、200710099900. 6公開了一種用離子交換樹脂分離鉤藤總生物堿的方法和200810011900. O公開了一種從鉤藤葉、帶鉤莖枝或全草中提取生物堿有效部位的方法及用途。其主要存在的問題是大孔樹脂法和離子交換樹脂法對于成分復雜的中藥提取液來說，樹脂再生困難，加之處理樹脂產生大量酸堿水，導致環境污染。本發明人采用酸水滲漉提取，提取物經乙醇醇沉后，提取物拌入硅藻土分散處理，丙酮滲漉提取，提取物經酸堿處理后，得鉤藤總生物堿。該鉤藤總生物堿具有純度高，吸收好，質量穩定，整個過程在常溫進行，不需加熱，節約了能源，減少了加熱導致的溶媒揮散等安全問題，同時制備方法分離效果佳，工藝簡單，操作方便，成本低廉，適合工業化生產。

發明內容
本發明的目的是開發出一種成本低、工藝簡單、對環境無污染、安全性高的鉤藤總生物堿的制備方法。取鉤藤藥材或全草粉碎成粗粉，用酸性水溶液進行滲漉，收集滲漉液，加氫氧化鈉溶液調節PH至中性后濃縮成清膏，加入乙醇醇沉，取上清液，回收乙醇，減壓濃縮成稠膏，加等量硅藻土減壓干燥，粉碎成粗粉，用丙酮進行滲漉，收集滲漉液，減壓回收丙酮，浸膏加稀鹽酸溶液加熱溶解，趁熱濾過，濾液冷卻至室溫，在攪拌下加氨水調調至堿性，室溫放置過夜，吸除上清液，沉淀減壓干燥，粉碎成細粉，得鉤藤總生物堿。本發明的鉤藤總生物堿的制備方法，其特征包括以下步驟(I)取鉤藤藥材或全草粉碎成粗粉，用10 20倍O. I % O. 5%的鹽酸溶液進行滲漉，收集滲漉液，加氫氧化鈉溶液調節PH至中性后濃縮至相至密度I. 10 I. 20 (800C )的清膏。(2)清膏加入乙醇使醇濃度達50 60%，充分攪拌，靜止24小時，濾過，濾液回收乙醇，減壓濃縮成稠膏，加等量硅藻土減壓干燥，粉碎成粗粉。(3)粗粉用10 20倍丙酮進行滲漉，收集滲漉液，減壓回收丙酮，得鉤藤總生物堿浸膏。
(4)鉤藤總生物堿浸膏加I 2%鹽酸溶液加熱溶解，趁熱濾過，濾液冷卻至室溫，在攪拌下加氨水調調至堿性，室溫放置過夜，吸除上清液，沉淀減壓干燥，粉碎成細粉，得鉤藤總生物堿。本發明中所制備的鉤藤總生物堿，加入適量的輔料，制成各種片劑、膠囊劑和滴丸
坐寸O下面通過有關具體藥效學試驗對本發明作進一步的闡述。一、對原發性高血壓模型動物(SHR)的影響I、血壓測定在穩定的環境中，保持室溫28°C將大鼠置于(38±0.5°C)溫箱中預熱10分鐘，將大鼠尾穿過壓尾器，平放于傳感器上，適應5分鐘向壓尾器充氣加壓，阻斷 尾部血流，待容積脈搏波消失后，緩慢而均勻地放氣，聽到容積脈搏波恢復有規律的聲音，此時的血壓表上指數即為收縮壓，注意在血壓測定過程中，動作要輕，不要引起動物過分激動。2、分組、給藥及結果將購進的自發性高血壓大鼠在新的環境中喂養一周后測其血壓。根據血壓將32只大鼠隨機分成四組模型組；降壓O號(北京雙鶴藥業股份有限公司生產)10. 3mg/kg劑量給藥組；鉤藤總生物堿30. O、15. Omg/kg兩個劑量給藥組；另設一組空白對照組(9只)，共計五個實驗組。每日灌胃給藥一次，連續三日，空白對照組及模型組同時給同體積蒸餾水10ml/kg。分別于第一次給藥后4小時及第二、三日給藥后I小時測大鼠尾動脈血壓(BP)，最后斷關取血，分離血清，用放免法測血清中NO、ANP、ALD的含量或活性。見表I、表2。由表中結果可見，空白對照組血壓正常、平穩；SHR血壓均在22-23Kpa，其BP與空白對照組比較明顯升高(P <0.001)。給藥后降壓O號組動物BP下降明顯(實測值與模型相KP < 0.01、P < O. 001，給藥前后自身變化百分率與模型組比較P < 0.01、P < O. 001)，連續給藥后各個時間點降壓幅度平均維持在26%左右；鉤藤總生物堿高劑量組給藥后BP下降明顯(實測值與模型組比P < O. 05，給藥前后自身變化百分率與模型組比較P < O. 05、P < O. 01)，連續給藥后各個時間點降壓幅度平均維持在12%左右；低劑量組連續給藥后也顯示出明顯降壓效果(給藥前后自身變化百分率與模型組比較P < O. 05)。SHR比正常大鼠血漿中醛固酮(ALD)顯著升高(P < O. 05)，心鈉素(ANP)含量有降低趨勢，一氧化氮(NO)含量有降低趨勢；降壓O號組給藥后ALD有降低趨勢，而ANP和NO無明顯變化；鉤藤總生物堿高劑量給藥后明顯降低ALD含量，但對NO、ANP影響不明顯。二、對腎性高血壓模型動物(RHR)的影響I、模型制備Mstar大鼠在固定的環境中飼養,5日后測基礎血壓三次,取平均血壓作為手術前動物正常血壓。然后施二腎一夾手術，以3%水合氯醛腹腔注射(10ml/kg)麻醉，消毒后，游離左腎動脈，用內徑O. 2_的銀夾夾閉，使左腎動脈部分狹窄，右腎不觸及，逐層縫合皮膚，手術在10分鐘內完成。術后為了避免感染，腹腔注射青霉素3ml/日(250萬單位/15ml)，連續7日。第二周開始以1% NaCl浴液代飲用水，第三周起以2% NaCl溶液代飲用水正常喂養，術后第三、四周測血壓，觀察血壓變化，待血壓平均升高30mmHg汞柱以上，認為模型成功。2、血壓測定方法同前。3、分組、給藥及結果術后第四周根據血壓升高程度將40只大鼠隨機分為五組模型組，降壓O號10. 3mg/kg劑量給藥組，鉤藤總生物堿30. O、15. 0,7. 5mg/kg三個劑量給藥組。每日灌胃一次，連續三日，對照組同時給同體積蒸餾水10ml/kg。分別于第一次給藥后4小時、8小時、12小時及第二日給藥后I小時、第三日給藥后th、24小時測尾動脈血壓。末次測血壓后將動物斷頭取血，分離血清，用放免法測血清中的ET和AII的活性。見表3、表4。由表中實驗結果可見,手術(造模后)第四周血壓較手術前升高5Kpa (約30mmHg)視為模型成功。模型組BP —直維持在18Kpa左右；降壓O號第一次給藥后BP明顯下降(與對照組比P < O. 05，P < O. 01)，BP下降一直持維到12小時以上，連續給藥后血壓下降幅度平均維持在21%左右；鉤藤總生物堿高劑量組給藥后BP降低明顯(與模型對照組比較P < O. 05)，第一次給藥后12小時血壓下降與對照組比具有明顯差異，連續給藥后血壓下降幅度平均維持在15%左右；中劑量給藥組給藥后BP明顯下降(與對照組比P < O. 05);低劑量組給藥后血壓也逐漸下降。鉤藤總生物堿給藥后降壓效果明顯，持續時間長。降壓O號和鉤藤總生物堿高劑量給藥組均能使血漿中的AII和ET含量有降低趨勢，但無統計學差異。三、連續多次給藥對清醒狀態下正常大鼠血壓的影響取Wistar大鼠50只隨機分成五組空白對照組，降壓O號10. 3mg/kg劑量給藥組，鉤藤總生物堿30. O、15. 0,7. 5mg/kg三個荊量給藥組。給藥前在穩定的環境中適應三天，于大鼠尾動脈血壓測定儀上測其正常血壓。然后開始給藥，每天一次，連續給藥十天，空白對照組給蒸餾水10ml/kg，并分別于第三、七、十天給藥后I小時測清醒狀態下大鼠血壓。結果見表5。由表5結果可見，連續給藥后空白對照組血壓基本穩定，而降壓O號及鉤藤總生物堿各給藥組，血壓較空白組明顯下降，降壓幅度維持在10%左右。
權利要求
1.鉤藤總生物堿的制備方法，其特征包括以下步驟 取鉤藤藥材或全草粉碎成粗粉，用酸性水溶液進行滲漉，收集滲漉液，加氫氧化鈉溶液調節PH至中性后濃縮成清膏，加入乙醇醇沉，取上清液，回收乙醇，減壓濃縮成稠膏，加等量硅藻土減壓干燥，粉碎成粗粉，用丙酮進行滲漉，收集滲漉液，減壓回收丙酮，浸膏加稀鹽酸溶液加熱溶解，趁熱濾過，濾液冷卻至室溫，在攪拌下加氨水調調至堿性，室溫放置過夜，吸除上清液,沉淀減壓干燥，粉碎成細粉，得鉤藤總生物堿。
2.根據權利要求I所述的一種鉤藤總生物堿的制備方法，其特征在于，取鉤藤藥材或全草粉碎成粗粉，用10 20倍O. I % O. 5%的鹽酸溶液進行滲漉，收集滲漉液，加氫氧化鈉溶液調節PH至中性后濃縮至相至密度I. 10 I. 20 (800C )的清膏。
3.根據權利要求I所述的一種鉤藤總生物堿的制備方法，其特征在于，清膏加入乙醇使醇濃度達50 60%，充分攪拌，靜止24小時，濾過，濾液回收乙醇，減壓濃縮成稠膏，加等量娃藻土減壓干燥,粉碎成粗粉。
4.根據權利要求I所述的一種鉤藤總生物堿的制備方法，其特征在于，粗粉用10 20倍丙酮進行滲漉，收集滲漉液，減壓回收丙酮，得鉤藤總生物堿浸膏。
5.根據權利要求I所述的一種鉤藤總生物堿的制備方法，其特征在于，鉤藤總生物堿浸膏加I 2%鹽酸溶液加熱溶解，趁熱濾過，濾液冷卻至室溫，在攪拌下加氨水調調至堿性，室溫放置過夜，吸除上清液，沉淀減壓干燥，粉碎成細粉，得鉤藤總生物堿。
全文摘要
本發明公開一種從中藥鉤藤全草中提取鉤藤總生物堿的方法，屬于中藥領域。該方法包括的技術方案取鉤藤藥材或全草粉碎成粗粉，用酸性水溶液進行滲漉，收集滲漉液，加氫氧化鈉溶液調節pH至中性后濃縮成清膏，加入乙醇醇沉，取上清液，回收乙醇，減壓濃縮成稠膏，加等量硅藻土減壓干燥，粉碎成粗粉，用丙酮進行滲漉，收集滲漉液，減壓回收丙酮，浸膏加稀鹽酸溶液加熱溶解，趁熱濾過，濾液冷卻至室溫，在攪拌下加氨水調調至堿性，室溫放置過夜，吸除上清液，沉淀減壓干燥，粉碎成細粉，得鉤藤總生物堿。該方案整個過程在常溫進行，不需加熱，節約了能源，減少了加熱導致的溶媒揮散等安全問題，同時制備方法分離效果佳，工藝簡單，操作方便，成本低廉，適合工業化生產。也克服了現有的多采用樹脂法提取鉤藤總生物堿的弊端。
文檔編號A61K36/74GK102626453SQ20111026653
公開日2012年8月8日 申請日期2011年9月9日 優先權日2011年9月9日
發明者仲崇琳, 楊美林, 許康 申請人:吉林省博時藥物新技術開發有限公司