專利名稱：一種藥物組合物及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發明屬于醫藥制劑技術領域，特別涉及一種藥物組合物及其制備方法和用途。
背景技術：
慢性腎炎是慢性腎小球腎炎(chronic glomerulonephritis)的簡稱，系指蛋白尿、血尿、高血壓、水腫為基本臨床表現，起病方式各有不同，病情遷延，病變緩慢進展，可以不同程度腎功能減退，最終將發展為慢性腎衰竭的一組腎小球疾病，屬于原發性腎小疾病的臨床分型，由多種病理類型引起。由于本組疾病的病理類型及病期不同，主要臨床表現各不相同，疾病表現呈多樣化。蛋白尿是CGN最常見的臨床表現和最早能檢測到的指標之一，大量的臨床和實驗研究發現，尿蛋白本身具有腎毒性，是進行腎衰的一種持久、獨立的惡化因素，是CGN預后不良的一種重要標志，所以減少和消除蛋白尿，是保護腎臟功能的重要措施之一。目前現代醫學對CGN蛋白尿的治療尚無理想的治療方案。一般采用西藥治療，蛋白尿、潛血易在短時間內得到控制，但也易在感冒、感染下復發，病情則在不斷反復中發展到后期，出現貧血、嚴重高血壓、惡心、嘔吐等癥狀，最終發展到尿毒癥。因此，治療慢性腎炎主要是不復發，其傳統治療措施通常采用一般治療和激素、免疫抑制劑治療等。由于反復性及強烈的副作用，越來越多的人排斥激素、免疫抑制劑類藥物，需要新的慢性腎炎治療方法。此外，運用中醫藥治療CGN蛋白尿受到國內醫家的關注，有作者基于近年來的文獻資料對CGN蛋白尿的中醫用藥規律進行總結。其方法是以中國期刊全文數據庫為檢索庫，檢索年限為1980 — 2009年，對有關中醫藥治療CGN文獻進行檢索。建立CGN蛋白尿中醫用藥文獻研究數據庫，采用sPss 11. 5軟件統計描述。結果共檢索得到有關文獻105篇，其中中藥共計163味，使用頻次1996次；所用藥物種類依次為補益藥、利水滲濕藥、清熱藥、活血祛瘀藥，收澀藥，占總體用藥的80. 02% ；其中藥味以甘、苦，辛為主，累積頻率迭86. 08%； 藥性以寒、溫、平為主，累積頻率迭96. 92%;歸經以肝、腎.脾.肺、心、胃為主，累積頻率達 86.31%。結論本病病機為本虛標實，脾虛、腎虛為本，濕熱和瘀血為標。臨床以補益藥、利水滲濕藥、清熱藥、活血化瘀藥、收澀藥等中藥運用為主。但這些中藥治療慢性腎炎的效果通常并不理想，部分中藥成分也會引起副作用，導致病情反復發作。

發明內容
本發明的主要目的是針對上述現有技術中存在的西藥治療慢性腎炎副作用大、不徹底、易復發，中藥治療慢性腎炎效果不明確、同樣有副作用及易復發等問題，提供一種新的藥物組合物，該藥物組合物治療慢性腎炎效果明確、安全無毒副作用，且不易復發。本發明的另一個目的是提供一種上述藥物組合物的制備方法。本發明的又一個目的是提供一種上述藥物組合物的用途。為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案如下
根據本發明的第一個技術方案，提供一種藥物組合物，它由以下重量份配比的原料藥材制成絡石藤8-30份，僵蠶0. 5-12份，水蛭0. 3_10份，魚腥草8_35份，萆蘚3_30份，/K 紅花子3-30份，黃芪3-30份，土牛膝1-25份。上述原料藥材的重量份配比優選為絡石藤10-25份，僵蠶1-10份，水蛭0. 5-6份，魚腥草10-30份，萆蘚5_25份，水紅花子5-25份，黃芪5-25份，土牛膝2-20份。上述原料藥材的重量份配比更優選為絡石藤15-20份，僵蠶2-7份，水蛭0. 8-5份，魚腥草15_25份，萆蘚10-20份，水紅花子10-20份，黃芪10-20份，土牛膝5-15份。上述原料藥材的重量份配比更優選為絡石藤16-19份，僵蠶2-5份，水蛭1_3份，魚腥草16-22份，萆蘚12-18份，水紅花子12-18份，黃芪12-18份，土牛膝7-12份。可進一步優選為絡石藤18份，僵蠶3份，水蛭1. 5份，魚腥草20份，萆蘚15份，水紅花子15份，黃芪15份，土牛膝10份。在制成藥物時，可根據本領域技術人員公知的藥劑常識，將上述原料藥材進行適當的預處理，然后制成各種藥劑學上的常用劑型的藥物。根據本發明的第二個技術方案，提供上述藥物組合物的制備方法，它包括以下步驟所述配比用量的僵蠶和水蛭分別單獨粉碎、然后將粉料進行混合后過篩或過篩后混合，或者兩者一起被粉碎然后過篩，從而制得第一種細粉I ；所述配比用量的絡石藤、魚腥草、萆蘚、水紅花子、黃芪和土牛膝分別進行提取，或這六種原料中以各種組合進行提取，從而獲得一種或兩種或多種提取物和任選的揮發油 (例如在提取過程中任選地收集揮發油)，所得提取物任選地進行濃縮和任選地進行干燥和/或粉碎(例如噴霧干燥，或烘干與粉碎)；這里，“這六種原料中以各種組合進行提取” 例如采用按照以下組合進行提取的方式其中的兩種原料(例如絡石藤和水紅花子)被混合在一起進行提取(例如用乙醇或乙醇溶液進行提取，如用50-95wt%濃度的乙醇水溶液進行提取)和另外四種原料(例如魚腥草、萆蘚、黃芪和土牛膝)被混在一起進行提取(例如水煮提取)(獲得兩種提取物)；或其中的三種原料(例如絡石藤、水紅花子和黃芪)被混合在一起進行提取(例如用乙醇或乙醇溶液進行提取，如用50-95wt%濃度的乙醇水溶液進行提取)和另外三種原料(例如魚腥草、萆蘚和土牛膝)被混在一起進行提取(例如水煮提取)(獲得兩種提取物)；或其中的兩種原料被混合在一起進行提取、另外兩種原料被混在一起進行提取和剩下的兩種原料被混在一起進行提取(獲得三種提取物)；其中的一種原料(例如魚腥草)進行提取、另外兩種原料(例如絡石藤和水紅花子)被混在一起進行提取和剩下的三種原料(萆蘚、黃芪和土牛膝)被混在一起進行提取(獲得三種提取物)；或這六種原料被混合在一起進行提取(獲得一種提取物)，等等；和將所獲得的第一種細粉I與以上所獲得的提取物和任選的揮發油進行混合，獲得
5藥物組合物。所獲得的藥物組合物在添加或不添加輔料的情況下按照常規方法被制成各種劑型，例如顆粒劑、片劑、丸劑、膠囊劑、合劑、口服液、滴丸、糖漿劑等形式的藥物或藥劑或制劑。以上所述的提取優選是乙醇提取和/或水煮提取。優選，乙醇提取是乙醇回流提取，和水煮提取是煎煮提取。優選，當進行水煮提取時任選地還收集揮發油。所收集的揮發油優選用β-環糊精包結。“任選”在這里表示“有”或“沒有”或表示“進行”或“不進行”。這里所述的“乙醇提取”中的“乙醇”是指純乙醇(純度> 98wt%至100wt%的乙醇)或任何濃度的乙醇水溶液，例如30-98襯％或30-95wt%濃度或40_90wt%濃度或 50-85wt %或60wt % 80wt %的乙醇水溶液。在下文中某濃度的乙醇水溶液簡稱某濃度的乙醇，例如60wt% 80wt%的乙醇水溶液簡稱60% 80%的乙醇。例如，上述藥物組合物可按照包括下述步驟的方法一制備(1)、粉碎將所述配比的僵蠶和水蛭粉碎，過100目篩，得細粉I備用；O)、乙醇提取將所述配比的絡石藤和水紅花子加30-95wt%濃度(優選 40-90wt%，更優選60wt% 80wt% )的乙醇回流提取2 3次，每次1 2小時，每次按藥材重量的4 8倍體積量加乙醇，濾過，合并濾液，回收乙醇，將回收乙醇后的藥液濃縮成相對密度為1. 05 1. 35 (60°C熱測)的膏狀，噴霧干燥，或者干燥后粉碎，得細粉II，備用；(3)、水煮提取將所述配比的魚腥草、萆蘚、黃芪、土牛膝加水煎煮2 3次，每次 1 2小時，每次按藥材重量的6 10倍體積量加水，同時收集揮發油；將水煮液濾過，合并濾液，濃縮成相對密度為1. 05 1. 35(60°C熱測)的膏狀，噴霧干燥，或者干燥后粉碎，得細粉III，備用；收集的揮發油加β-環糊精包結，得揮發油包結物，備用；(4)、制劑取上述步驟(1)、(2)、(3)得到的細粉I、II、III和揮發油包結物，混勻，按照不同劑型藥物的常規制劑方法，必要時加入適量輔料，制成制劑，即得。上述方法的步驟(2)和步驟(3)中，將藥液濃縮時，可濃縮成相對密度為1. 05 1. 20的清膏(60°C熱測)，噴霧干燥成干膏粉，備用；也可濃縮成相對密度為1. 30 1. 32的稠膏(60°C熱測)，干燥成干膏，再粉碎成細粉，備用。或者，上述藥物組合物還可按照包括下述步驟的方法二制備(1)、粉碎將所述配比的僵蠶和水蛭粉碎，過100目篩，得細粉I備用；(2)、水煮提取將所述配比的絡石藤、水紅花子、魚腥草、萆蘚、黃芪、土牛膝加水煎煮2 3次，每次1 2小時，每次按藥材重量的6 10倍體積量加水，同時收集揮發油； 將水煮液濾過，合并濾液，濃縮成相對密度為1. 05 1. 35(60°C熱測)的膏狀，噴霧干燥，或者干燥后粉碎，得細粉II，備用；收集的揮發油加β-環糊精包結，得揮發油包結物，備用；(3)、制劑取上述步驟(1)、(2)得到的細粉I、II和揮發油包結物，混勻，按照不同劑型藥物的常規制劑方法，必要時加入適量輔料，制成制劑，即得。上述方法的步驟(2)和步驟(3)中，將藥液濃縮時，可濃縮成相對密度為1. 05 1. 20的清膏(60°C熱測)，噴霧干燥成干膏粉，備用；也可濃縮成相對密度為1. 30 1. 32的稠膏(60°C熱測)，干燥成干膏，再粉碎成細粉，備用。上述制備方法的“制劑”步驟中，加入輔料的種類和份量，可按照藥劑學中不同劑型藥物的常規加入種類及份量等進行選擇。上述藥物組合物，可制成各種藥劑學上可行的口服藥物劑型，如顆粒劑、片劑、膠囊劑、合劑、口服液、滴丸等。上述原料藥材均分別為國家藥品標準收載的中藥材，其來源分別如下絡石藤為夾竹桃科植物絡石 jTrachelospermum jasminoioides (Lindl.) Lem.的干燥帶葉藤莖。僵蠶為蠶蛾科昆蟲家蠶Bombyx mori Linnaeus 4 5齡的幼蟲感染(或人工接種)白僵菌 Beauveria bassiana(Bals. ) Vuillant 而致死的干燥體。/K 蛭為 7jC 蛭科動物螞幢 Whitmania pigra Whitman、/K 蛭 Hirudonipponica Whitman 或柳葉螞蝗 Whitmania acranulata Whitman 的干燥全體。魚腥草為三白草科植物蕺菜Houttuynia cordata Thunb.的干燥地上部分。萆蘚為百合科植物菝葜Smilax china L.、長托菝葜Smilax ferox Wall, ex Kunth、黑果菝葜 Smilax glauco-china Warb.或紅果菝葜 Smilaxpolycoiea Warb.的干燥根莖。水紅花子為蓼科植物紅蓼Polygonum orientale L.的干燥成熟果實。黃苗為豆禾斗植物蒙古黃苗 Astragalus membranaceus (Fisch. )Bge. var. mongholicus (Bge. ) Hsiao 或膜莢黃苗 Astragalus membranaceus (Fisch.)的干燥根。土牛膝為莧科植物粗毛牛膝Achyranthes aspera L.、牛膝 Achyranthesbidentata Bi.的干燥根及根莖。上述原料藥配方中，絡石藤味苦、辛、性微寒，入腎經，又以其藤蔓之屬能直達腎絡，并藉其辛以散風，苦以燥濕，寒以清熱，故能驅逐竄入腎絡之風濕熱合邪，通絡除痹以為君藥；僵蠶咸、辛性平，具有祛風解毒，化痰散結之作用，對風熱挾痰，郁滯腎絡正為其所治； 川萆蘚性平，味苦，功擅利濕去濁，祛風通痹。二藥為臣，有助君藥祛風通絡，清熱利濕之功； 佐以水蛭破瘀消積，通絡利水；魚腥草清熱解毒，利尿通淋；黃芪補氣充絡，托邪外出。使以土牛膝活血散瘀，解毒利濕，引藥下行。諸藥共奏祛風清熱利濕，活血通絡之功。主治慢性腎炎之風濕熱擾腎，腎絡瘀痹證。癥見蛋白尿和/或血尿，咽喉腫痛，肢體重滯，肌肉關節疫楚，皮膚濕疹瘙癢，面色黧黒或晦暗，腰痛固定或刺痛，小便黃赤，舌質紫暗或有瘀點、瘀斑、 舌苔黃膩。根據本發明的第三個技術方案，提供了上述藥物組合物用于制備治療慢性腎炎的藥物或藥劑的用途。與現有技術相比，本發明的有益效果是本發明通過大量試驗篩選而選用特定的原料藥材組成，祛風清熱利濕、活血通絡功能顯著，特別適用于風濕熱邪襲擾腎絡，導致腎絡瘀痹，日久絡息成積之慢性腎小球腎炎。通過動物藥效學試驗和毒性試驗證實其治療效果明顯，毒副作用小。
具體實施例方式下面結合具體實施方式
對本發明的上述發明內容作進一步的詳細描述。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于下述實施例。在不脫離本發明上述技術思想情況下，根據本領域普通技術知識和慣用手段，做出各種替換和變更，均應包括在本發明的范圍內。
實施例1本實施例為治療慢性腎炎的顆粒劑，由以下重量的原料藥材制成絡石藤180g，僵蠶30g，水蛭15g，魚腥草200g，萆蘚150g，水紅花子150g，黃芪 150g，土牛膝 IOOg0本實施例治療慢性腎炎的顆粒劑由包括下述主要步驟的方法制得(1)、粉碎將所述配比的僵蠶和水蛭粉碎，過100目篩，得細粉I備用；O)、乙醇提取將所述配比的絡石藤和水紅花子加60%的乙醇回流提取3次，每次分別2小時、1小時、1小時，每次分別按藥材重量的8倍體積量、6倍體積量和4倍體積量加乙醇，濾過，合并濾液，回收乙醇，將回收乙醇后的藥液濃縮成相對密度約為1.05 1.20(60°C熱測)的清膏，噴霧干燥，得細粉II，備用；(3)、水煮提取將所述配比的魚腥草、萆蘚、黃芪、土牛膝加水煎煮3次，每次分別2小時、1. 5小時、1小時，每次分別按藥材重量的10倍體積量、8倍體積量和6倍體積量加水，同時收集揮發油；將水煮液濾過，合并濾液，濃縮成相對密度為1. 05 1. 20(60°C熱測)，干燥后粉碎，得細粉III，備用；收集的揮發油加環糊精包結，得揮發油包結物，備用；(4)、制劑取上述步驟(1)、(2)、(3)得到的細粉I、II、III和揮發油包結物，混勻，按照顆粒劑的常規制劑方法，加入適量輔料(可溶性淀粉100g、蔗糖35g)，制成顆粒劑， 即得。實施例2本實施例為治療慢性腎炎的顆粒劑，由以下重量的原料藥材制成絡石藤150g，僵蠶20g，水蛭15g，魚腥草150g，萆蘚150g，水紅花子150g，黃芪 150g，土牛膝 IOOg0本實施例治療慢性腎炎的顆粒劑由包括下述主要步驟的方法制得(1)、粉碎將所述配比的僵蠶和水蛭粉碎，過100目篩，得細粉I備用；O)、乙醇提取將所述配比的絡石藤和水紅花子加80%的乙醇回流提取2次，每次2小時，每次按藥材重量的8倍體積量加乙醇，濾過，合并濾液，回收乙醇，將回收乙醇后的藥液濃縮成相對密度為1. 30 1. 32的稠膏(60°C熱測)，干燥后粉碎，得細粉II，備用；(3)、水煮提取將所述配比的魚腥草、萆蘚、黃芪、土牛膝加水煎煮2次，每次2小時，每次按藥材重量的10倍體積量加水，同時收集揮發油；將水煮液濾過，合并濾液，濃縮成相對密度為1. 30 1. 32的稠膏(60°C熱測)，干燥后粉碎，得細粉III，備用；收集的揮發油加β-環糊精包結，得揮發油包結物，備用；0)、制劑取上述步驟(1)、(2), (3)得到的細粉I、II、III和揮發油包結物，混勻，按照顆粒劑的常規制劑方法，加入適量輔料(糊精150g、蔗糖30g)，制成顆粒劑，即得。實施例3本實施例為治療慢性腎炎的片劑，由以下重量的原料藥材制成絡石藤250g，僵蠶20g，水蛭30g，魚腥草100g，萆蘚200g，水紅花子250g，黃芪 50g，土牛膝 150g。本實施例治療慢性腎炎的片劑由包括下述主要步驟的方法制得(1)、粉碎將所述配比的僵蠶和水蛭粉碎，過100目篩，得細粉I備用；6/23 頁O)、乙醇提取將所述配比的絡石藤和水紅花子加70%的乙醇回流提取2次，每次2小時，每次按藥材重量的6倍體積量加乙醇，濾過，合并濾液，回收乙醇，將回收乙醇后的藥液濃縮成相對密度為1. 10 1. 20的清膏(60°C熱測)，噴霧干燥，得細粉II，備用；(3)、水煮提取將所述配比的魚腥草、萆蘚、黃芪、土牛膝加水煎煮2次，每次2小時，每次按藥材重量的10倍體積量加水，同時收集揮發油；將水煮液濾過，合并濾液，濃縮成相對密度為1. 05 1. 10的清膏(60°C熱測)，噴霧干燥，得細粉III，備用；收集的揮發油加β-環糊精包結，得揮發油包結物，備用；(4)、制劑取上述步驟(1)、(2)、(3)得到的細粉I、II、III和揮發油包結物，混勻，按照片劑的常規制劑方法，加入適量輔料(淀粉50g)，制粒、壓制成片劑，即得。實施例4本實施例為治療慢性腎炎的顆粒劑，由以下重量的原料藥材制成絡石藤100g，僵蠶100g，水蛭5g，魚腥草250g，萆蘚250g，水紅花子50g，黃芪 160g，土牛膝 50g。本實施例治療慢性腎炎的顆粒劑由包括下述主要步驟的方法制得(1)、粉碎將所述配比的僵蠶和水蛭粉碎，過100目篩，得細粉I備用；(2)、水煮提取將所述配比的絡石藤、水紅花子、魚腥草、萆蘚、黃芪、土牛膝加水煎煮3次，每次分別2小時、1. 5小時、1小時，每次分別按藥材重量的10倍體積量、8倍體積量和6倍體積量加水，同時收集揮發油；將水煮液濾過，合并濾液，濃縮成相對密度為 1.05 1.20(60°C熱測)，干燥后粉碎，得細粉II，備用；收集的揮發油加β-環糊精包結， 得揮發油包結物，備用；(3)、制劑取上述步驟(1)、(2)得到的細粉I、II和揮發油包結物，混勻，按照顆粒劑的常規制劑方法，加入適量輔料(糊精50g、蔗糖20g)，制成顆粒劑，即得。實施例5本實施例為治療慢性腎炎的顆粒劑，由以下重量的原料藥材制成絡石藤200g，僵蠶60g，水蛭60g，魚腥草100g，萆蘚150g，水紅花子200g，黃芪 200g，土牛膝 20g。本實施例治療慢性腎炎的顆粒劑由包括下述主要步驟的方法制得(1)、粉碎將所述配比的僵蠶和水蛭粉碎，過100目篩，得細粉I備用；(2)、水煮提取將所述配比的絡石藤、水紅花子、魚腥草、萆蘚、黃芪、土牛膝加水煎煮2次，每次2小時，每次按藥材重量的10倍體積量加水，同時收集揮發油；將水煮液濾過，合并濾液，濃縮成相對密度為1. 30 1. 32的稠膏(60°C熱測)，干燥后粉碎，得細粉II， 備用；收集的揮發油加環糊精包結，得揮發油包結物，備用；(3)、制劑取上述步驟(1)、(2)得到的細粉I、II和揮發油包結物，混勻，按照顆粒劑的常規制劑方法，加入適量輔料(蔗糖40g)，制成顆粒劑，即得。實施例6本實施例為治療慢性腎炎的片劑，由以下重量的原料藥材制成絡石藤220g，僵蠶10g，水蛭40g，魚腥草180g，萆蘚100g，水紅花子120g，黃芪 100g，土牛膝 180g。本實施例治療慢性腎炎的片劑由包括下述主要步驟的方法制得
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(1)、粉碎將所述配比的僵蠶和水蛭粉碎，過100目篩，得細粉I備用；(2)、水煮提取將所述配比的絡石藤、水紅花子、魚腥草、萆蘚、黃芪、土牛膝加水煎煮2次，每次2小時，每次按藥材重量的10倍體積量加水，同時收集揮發油；將水煮液濾過，合并濾液，濃縮成相對密度為1. 05 1. 10的清膏(60°C熱測)，噴霧干燥，得細粉II，備用；收集的揮發油加環糊精包結，得揮發油包結物，備用；(3)、制劑取上述步驟(1)、(2)得到的細粉I、II和揮發油包結物，混勻，按照片劑的常規制劑方法，加入適量輔料(糊精20g)，制粒、壓制成片劑，即得。實施例7本實施例為治療慢性腎炎的片劑，由以下重量的原料藥材制成絡石藤220g，僵蠶50g，水蛭20g，魚腥草300g，萆蘚50g，水紅花子100g，黃芪 250g，土牛膝 20g。本實施例治療慢性腎炎的片劑由包括下述主要步驟的方法制得(1)、粉碎將所述配比的僵蠶和水蛭粉碎，過100目篩，得細粉I備用；(2)、水煮提取將所述配比的絡石藤、水紅花子、魚腥草、萆蘚、黃芪、土牛膝加水煎煮2次，每次分別2小時、1小時，每次分別按藥材重量的10倍和8倍體積量加水，同時收集揮發油；將水煮液濾過，合并濾液，濃縮成相對密度為1. 05 1. 10的清膏(60°C熱測)， 噴霧干燥，得細粉II，備用；收集的揮發油加β-環糊精包結，得揮發油包結物，備用；(3)、制劑取上述步驟(1)、(2)得到的細粉I、II和揮發油包結物，混勻，按照片劑的常規制劑方法，加入適量輔料(糊精30g)，制粒、壓制成片劑，即得。為證實本發明藥物組合物的有效性及安全性，發明人進行了嚴格的動物藥效學試驗和毒性試驗考察，從而證實了上述原料藥材制成的藥物組合物具有顯著的祛風清熱利濕、活血通絡等功能，特別適用于風濕熱邪襲擾腎絡，導致腎絡瘀痹，日久絡息成積之慢性腎小球腎炎。部分動物藥效學試驗和急性毒性試驗考察方法和結果分別如下一、本發明藥物組合物對大鼠C-BSA腎炎模型的影響本試驗以陽離子化牛血清蛋白(C-BSA)制成的大鼠原位免疫復合物型慢性腎炎模型為實驗對象，觀察本發明藥物組合物的療效。1實驗材料1.1受試藥物以上述實施例1和實施例4所得的顆粒劑為試驗藥物，天藤通腎絡顆粒I和II (試驗藥物，即本發明藥物組合物顆粒劑)，分別按實施例 1和實施例4的配比及制備方法生產，IOg/袋，1袋/次，3次/日，由湖南明瑞制藥有限公司生產，批號100301 ；腎復康膠囊(中藥陽性對照)，國藥準字Z220M866，0. 30g/粒，4 6粒/次，3次/日，通化茂祥制藥有限公司出品，批號091105;醋酸潑尼松片(化學藥陽性對照)，國藥準字H44021868, 5. Omg/片，5 IOmg/次，10 60mg/日，廣東南國藥業有限公司出品，批號091004。實驗時，所有藥品均用純水配制成相應濃度的混懸液供動物灌胃用。1.2實驗試劑牛血清白蛋白(BSA)，純度96 99%，上海伯奧生物科技有限公司，批號090811 ； 乙二胺(EDA)，AR，廣東汕頭市西隴化工廠，批號081210 ；1-乙基_3_(3-二甲胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)，Sigma分裝；透析袋，MW8000-14000, USA, Exp2010. 08 ；弗氏不完全佐劑，IOml/瓶，北京鼎國生物技術有限責任公司。尿蛋白定量(CBB法，批號20090912)、隱血(鄰聯甲苯胺顯色法，20091010)、尿蛋白定性(磺基水楊酸法，批號20090820)、N0 (硝酸還原法，20090725)、S0D (黃嘌呤氧化法， 20091104)、MDA(硫代巴比妥酸法，20100120)，購自南京建成生物工程研究所。TC (氧化酶法，2009121 、TG (甘油磷酸氧化酶法，20090901)、Cre (肌氨酸氧化酶法，20091124)、BUN (紫外-谷氨酸脫氫酶法，20091101)、TP (雙縮脲比色法，20091208)、 ALB(溴甲酚綠法，20091101)測定試劑盒，購自上海科華生物工程股份有限公司。其它試劑，濃鹽酸、冰醋酸、乙酸鈉、NaH2PO4· 2H20、Na2HPO4 · 12H20、(NH4)2SO4, EDTA-2Na、CuSO4 · 5H20、NaOH、NaF、NaCl、PEG6000、檸檬酸鈉、酒石酸鉀鈉、硼酸、硼砂、無水乙醇、丙酮、甲醛等，均為國產AR。1.3實驗儀器AL104電子分析天平，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司JJ2000型電子天平， 常熟雙杰測試儀器廠；F5810-R型臺式高速冷凍離心機，德國Eppendorf公司；ALPHA1-4LSC 型冷凍干燥機，德國CHRIST公司；Thermol500型酶標儀，芬蘭雷勃公司；1575洗板機，美國 BIO-Rad公司；TMS-10M全自動生化分析儀，日本東京株市會社；UW801紫外分光光度計， 日本島津；722分光光度計，上海精密科學儀器有限公司；C2000-4高性能血凝儀，北京普利生儀器有限公司；Mi 11 ipore超純水處理系統，美國Mi 11 ipore公司；擬8精密PH計，美國奧立龍；L-4磁力攪拌器，鞏義市英峪予華儀器廠；LDZX-40BI壓力滅菌器，上海申安醫療器械廠；PTO-DHS600B II隔水電熱恒溫培養箱，上海躍進醫療器械廠。1.4實驗動物選用SPF級雄性SD大鼠，體重180 220g，由由成都百康醫藥工業藥理毒理研究院提供(生產許可證號=SCXK (川)2003-06)。動物飼養于IVC動物實驗室，溫度20 25°C (日溫差彡3°C )，濕度40% 70%， 照明12h :12h明暗交替，照度150 3001x，噪音< 60dB ；成都中醫藥大學藥學院動物觀察室(四川省試驗動物管理委員會試驗動物設施條件合格證號川實動管使第2003-015 號)。2實驗方法2. 1模型制備與給藥分組2. 1. 1陽離子化牛血清白蛋白(C-BSA)的制備根據改進的Border法，取EDA350ml，加入雙蒸水2. 5L，再加入6mol/L鹽酸1. 75L， 攪拌均勻，冷卻至25°C，以濃鹽酸調pH至4. 75 ；攪拌中加入20% BSA水溶液150ml (30g)， 然后加入12gEDC(以25ml水溶解)，25°C攪拌反應Mi ；加入4mol/L、PH 4. 75的醋酸緩沖溶液150ml，以終止反應；按反應液體積加入粉末(NH4)2SO4使飽和度達到0. 8 (561g/L)，攪拌均勻，靜置他以上；12000rpm離心lOmin，收集沉淀，上清液按73g/L加入粉末(NH4)2SO4至飽和度達0. 9，靜置、離心收集沉淀，合并兩次沉淀以500ml水溶解，過濾，濾液于4°C對水透析除鹽7 (滲透液PH6. 5 8. 0)，濃縮液過濾后經冷凍干燥得C-BSA粉劑成品25g。按上述方法制備的C-BSA，紫外法檢測(以不同濃度的標準BSA對OD28tl制作標準曲線，曲線方程A = 0. 607C+0. 0005，r2 = 0. 9999，線性范圍0. 2 2. 0mg/ml)純度為 86. 39%，成品凈收率72. 99% ；等電聚焦電泳檢測其PI為9. 0。
2. 1. 2C-BSA致大鼠腎小球腎炎模型制備稱取適量C-BSA凍干粉末，以0. 15mol/L、PH7. 4的滅菌PBS溶液配制為2. 5. Omg/ ml溶液，用0.22 μ m微孔濾膜過濾除菌并無菌分裝，_20°C保存。臨用前取出緩慢融化，與等量弗氏不完全佐劑研磨成白色乳劑，在造模大鼠雙側腋下、腹股溝作多部位皮下預免疫注射，每只1ml。預免疫1周后，每只大鼠尾靜脈注射Iml濃度為2. 5mg/ml的C-BSA作為正式免疫，每周3次，共10次；正常對照組大鼠注射等量PBS。給藥期間應根據模型動物的尿蛋白測定結果，決定是否持續免疫，以保證實驗模型的穩定性。在本實驗中，給藥2周的造模各組動物24h尿蛋白量均顯著下降，因此確定從第3周起每周持續免疫2次，直至實驗結束。2. 1.3動物分組及給藥取180 200g雄性SD大鼠在IVC動物實驗室適應性飼養2周，選擇尿蛋白為陰性者136只，除留10只為正常對照外，其余1 只均用于造模。在正式免疫10次后，將造模成功的109只大鼠根據尿蛋白和體重相對均勻分為9組模型對照組13只；化學藥陽性對照醋酸潑尼松5. 0mg/kg(相當于臨床人用量的5倍)組12只；中藥對照腎復康膠囊0. 9g/ kg (相當于臨床人用量的10倍)組12只；天藤通腎絡顆粒I (實施例1的顆粒劑)2. 5g/kg、 5. 0g/kgU0. Og/kg劑量組(分別相當于臨床人用量的5倍、10倍、20倍)各12只、天藤通腎絡顆粒II (實施例4的顆粒劑)2. 5g/kg、5. Og/kg、10. Og/kg劑量組(分別相當于臨床人用量的5倍、10倍、20倍)各12只。各組動物每日按劑量灌胃給藥一次，連續35d，容量均為10ml/kg，正常和模型對照組給予等容量純水。2. 2觀察指標及測定2. 2.1尿蛋白定量分別收集每只動物預免疫前、正式免疫10次及給藥后2、4、5周的24h尿液，量取體積，用CBB法測定尿液中蛋白含量，計算尿蛋白總量，以mg//24h表示。2. 2. 2血液相關指標檢測給藥后5周，所有動物禁食不禁水12小時，股動脈取血5ml，4°C、4000rpm離心 lOmin，分離血清，用全自動生化分析儀測定TC、TG、Cre, BUN、TP、ALB，計算A/G ；芬蘭科華ST-360酶標儀、SW-36W洗板機測定IgG、IgA、IgM含量；用722分光光度計595nm處按 PEG-NaF比濁法測定血清CIC (循環免疫復合物)含量；按試劑盒方法測定SOD、MDA含量。另取動脈血1. 35ml，加入到含0. 15ml檸檬酸鈉抗凝劑(109mmOl/L)的試管中，置旋渦震蕩器上充分混勻，4°C、4000rpm離心lOmin，分離血漿，用C2000-4高性能血凝儀(磁珠法)檢測 PT、APTT、TT、FIB。2. 2. 3普通光鏡觀察放血處死動物，剖取左右腎臟稱重，肉眼觀察外觀大小和色澤，計算各組大鼠的腎臟指數；取左側新鮮腎皮質組織，FAA固定液固定，梯度乙醇脫水，石蠟包埋，制成3 μ m切片分別進行HE、PAS和Masson染色；光鏡下觀察腎組織的各種病理變化。2. 3統計學方法計量資料用平均數士標準差(〒士 S)表示，差異顯著性檢驗若方差齊則采用SNK 檢驗，方差不齊采用Kruskal-Wallis檢驗；若差異具有統計學意義(P < 0. 05)則進行組間比較，方差齊時組間比較采用LSD檢驗，方差不齊時組間比較采用Tamhane’ s T2檢驗。計數資料差異顯著性檢驗采用參照單位分析(Reference Identical Unit，Ridit)，Fisher，s 確切概率法X2檢驗。3實驗結果及結論3.1試驗結果見表-1、表-2、表-3、表-3、表-4、表_5和表_6。3. 2 結論3. 2. 1對模型動物尿蛋白的影響由表-1可見，模型動物調整分組后，各模型組給藥前24h尿蛋白水平大致均勻，并顯著高于空白對照組，表明給藥前各模型組腎臟的損傷程度大致相當。給藥14d，用藥各組24h的尿蛋白總量均低于模型對照組，以腎復康0. 9g/kg組作用顯著，與模型對照相比降低了 34. 42%。給藥觀山各給藥組均能非常顯著地降低模型大鼠Mh的尿蛋白。給藥35d，各給藥組均能非常顯著地降低模型大鼠Mh的尿蛋白，提示天藤通腎絡顆粒可明顯減輕慢性腎炎所致的蛋白尿。3. 2. 2對血液相關指標的影響3. 2. 2. 1對血液生化的影響由表-2可見，與空白組相比，模型組動物血清TC、TG顯著升高，TP、ALB顯著下降， A/G有降低趨勢，但Cre、BUN的變化不明顯；表明由C-BSA介導的慢性腎炎模型大鼠同時并發高脂血癥和低蛋白血癥，與慢性腎炎病人臨床觀察結果一致。連續給藥35d，陽性對照醋酸潑尼松5. Omg/kg,能明顯升高模型大鼠血清TP和 ALB、降低TC，對TG僅有降低趨勢，對A/G、Cre、BUN無明顯影響；中藥對照腎復康膠囊0. 9g/ kg，可明顯降低模型動物的TG，對TP和ALB有升高趨勢，對TC有降低趨勢，對A/G無明顯影響，但能增加Cre和BUN ；天藤通腎絡顆粒各個劑量組，均能顯著升高模型動物的血清TP、 ALB (TP接近正常水平)，顯著降低TC、TG (均接近正常水平)，對A/G、Cre、BUN無明顯影響； 提示天藤通腎絡顆粒可糾正慢性腎炎所致的低蛋白血癥和高脂血癥。3. 2. 2. 2對免疫球蛋白和循環免疫復合物的影響由表-3可見，與空白組相比，模型對照組動物的血清CIC和IgM顯著增加、IgA和 IgG顯著下降，表明由C-BSA介導的慢性腎炎模型大鼠血液中循環免疫復合物過高、各種免疫球蛋白的水平異常，與慢性腎炎病人的臨床觀察結果一致。連續給藥35d，醋酸潑尼松5. Omg/kg,能明顯升高模型大鼠的血清IgGJ^ CIC和 IgM僅有降低趨勢而無統計學差異，對IgA無明顯影響；腎復康膠囊0. 9g/kg和天藤通腎絡顆粒各劑量組，均能明顯降低模型動物的血清CIC，升高IgA ；不同程度升高IgG，不同程度降低IgM。提示天藤通腎絡顆粒可糾正慢性腎炎所致主要免疫球蛋白水平的異常，減少CIC 的生成或促進其從血液中消除。3. 2. 2. 3對血液凝血功能的影響由表-4可見，與空白組相比，模型組動物的FIB含量顯著增高、時間明顯縮短，TT 明顯延長、APTT和PT變化不明顯，表明由C-BSA介導的慢性腎炎模型大鼠血液中纖維蛋白原含量的明顯增加使血液處于高凝狀態，與慢性腎炎病人的臨床觀察結果一致。連續給藥35d，照醋酸潑尼松5. Omg/kg和腎復康膠囊0. 9g/kg，能明顯降低模型大鼠的FIB含量、延長FIB時間、縮短TT，對APTT有縮短趨勢，對PT無明顯影響；天藤通腎絡顆粒各個劑量組均能明顯降低FIB的含量、延長FIB時間，不同程度縮短TT和PT時間，中、 高劑量組有延長APTT的趨勢；提示天藤通腎絡顆粒可調節慢性腎炎的異常凝血功能，改善血液的高凝狀態。3. 2. 2. 4對抗氧化能力的影響由表-5可見，與空白組相比，模型組動物血清SOD活力顯著降低、MDA含量顯著升高，表明由C-BSA介導的慢性腎炎模型大鼠抗氧化能力降低，間接反映腎小球的損傷程度。連續給藥35d，醋酸潑尼松5. Omg/kg組，僅有增加模型大鼠血清中SOD活力、降低 MDA含量的趨勢，但無統計學差異；腎復康膠囊0. 9g/kg，有增加模型大鼠血清中SOD活力的趨勢，還能明顯降低MDA含量；天藤通腎絡顆粒各個劑量組能不同程度增加模型大鼠血清中的SOD活力，明顯降低MDA的含量，提示天藤通腎絡顆粒可通過提高抗氧化能力，對慢性腎炎所致的腎臟損傷具有明顯保護作用。3. 2. 3對腎組織觀察空白對照組腎臟棕褐色；與空白對照組相比，模型對照組8例(8/13)、醋酸潑尼松組2例0/12)腎臟表面及切面皮質顏色變淺，呈蒼白色；其余各組肉眼觀察未見明顯異常。由表-6可見，模型組腎臟指數顯著高于空白對照組，表明由C-BSA介導的慢性腎炎大鼠腎臟明顯增大，可能與腎小球損傷或腫脹有關；與模型對照組相比，醋酸潑尼松、腎復康膠囊、天藤通腎絡顆粒(I)2.5、5.0g/kg組和天藤通腎絡顆粒(II)5.0、10.0g/kg組的腎臟指數顯著降低，天藤通腎絡顆粒(I)10.0g/kg組和天藤通腎絡顆粒(11)2. 5g/kg組的腎臟指數亦有降低趨勢。表-1對C-BSA腎炎模型大鼠尿蛋白的影響(i ±· )
權利要求
1.一種藥物組合物，由以下重量份配比的原料藥材制成絡石藤8-30份，僵蠶0. 5-12份，水蛭0. 3-10份，魚腥草8_35份，萆蘚3_30份，水紅花子3-30份，黃芪3-30份，土牛膝1-25份。
2.根據權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述的原料藥材的重量份配比為 絡石藤10-25份，僵蠶1-10份，水蛭0. 5-6份，魚腥草10-30份，萆蘚5_25份，水紅花子5-25份，黃芪5-25份，土牛膝2-20份。
3.根據權利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于 所述的原料藥材的重量份配比為絡石藤15-20份，僵蠶2-7份，水蛭0. 8-5份，魚腥草15-25份，萆蘚10-20份，水紅花子10-20份，黃芪10-20份，土牛膝5-15份。
4.根據權利要求1-3中任何一項所述的藥物組合物，其特征在于 所述的原料藥材的重量份配比為絡石藤15-20份，僵蠶1-5份，水蛭0. 5-3份，魚腥草15-25份，萆蘚10-20份，水紅花子10-20份，黃芪10-20份，土牛膝5-15份。
5.根據權利要求1-4中任何一項所述的藥物組合物，其中藥物組合物是顆粒劑、片劑、 丸劑、膠囊劑、合劑、口服液、滴丸或糖漿劑形式的藥物或藥劑或制劑。
6.制備權利要求1-5中任一項所述的藥物組合物的方法，該方法包括以下步驟 所述配比用量的僵蠶和水蛭分別單獨粉碎、然后將粉料進行混合后過篩或過篩后混合，或者兩者一起被粉碎然后過篩，從而制得第一種細粉；所述配比用量的絡石藤、魚腥草、萆蘚、水紅花子、黃芪和土牛膝分別進行提取，或這六種原料中以各種組合進行提取，從而獲得一種或兩種或多種提取物和任選的揮發油，所得提取物任選地進行濃縮和任選地進行干燥和/或粉碎； 禾口將所獲得的第一種細粉與以上所獲得的提取物和任選的揮發油進行混合，獲得藥物組合物。
7.根據權利要求6的方法，包括下述主要步驟(1)、粉碎將所述配比的僵蠶和水蛭粉碎，過100目篩，得細粉I備用； O)、乙醇提取將所述配比的絡石藤和水紅花子加30-95wt%的乙醇回流提取2 3 次，每次1 2小時，每次按藥材重量的4 8倍體積量加乙醇，濾過，合并濾液，回收乙醇， 將回收乙醇后的藥液濃縮成60°C熱測其相對密度為1. 05 1. 35的膏狀，噴霧干燥，或者干燥后粉碎，得細粉II，備用；(3)、水煮提取將所述配比的魚腥草、萆蘚、黃芪、土牛膝加水煎煮2 3次，每次1 2小時，每次按藥材重量的6 10倍體積量加水，同時收集揮發油；將水煮液濾過，合并濾液，濃縮成60°C熱測其相對密度為1. 05 1. 35的膏狀，噴霧干燥，或者干燥后粉碎，得細粉 III，備用；收集的揮發油加β-環糊精包結，得揮發油包結物，備用；G)、制劑取上述步驟(1)、O)、⑶得到的細粉I、II、III和揮發油包結物，混勻，按照不同劑型藥物的常規制劑方法，制成制劑，即得。
8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于所述的步驟( 和步驟(3)中，將藥液濃縮時，濃縮成60°C熱測其相對密度為1.05 ·1. 20的清膏，噴霧干燥成干膏粉，備用。
9.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于所述的步驟( 和步驟(3)中，將藥液濃縮時，濃縮成60°C熱測其相對密度為1.30 1. 32的稠膏，干燥成干膏，再粉碎成細粉，備用。
10.根據權利要求6的方法，包括下述主要步驟(1)、粉碎將所述配比的僵蠶和水蛭粉碎，過100目篩，得細粉I備用；(2)、水煮提取將所述配比的絡石藤、水紅花子、魚腥草、萆蘚、黃芪、土牛膝加水煎煮 2 3次，每次1 2小時，每次按藥材重量的6 10倍體積量加水，同時收集揮發油；將水煮液濾過，合并濾液，濃縮成60°C熱測其相對密度為1. 05 1. 35的膏狀，噴霧干燥，或者干燥后粉碎，得細粉II，備用；收集的揮發油加β-環糊精包結，得揮發油包結物，備用；(3)、制劑取上述步驟(1)、(2)得到的細粉I、II和揮發油包結物，混勻，按照不同劑型藥物的常規制劑方法，制成制劑，即得。
11.根據權利要求10所述的制備方法，其特征在于所述的步驟O)中，將藥液濃縮時，濃縮成60°C熱測其相對密度為1. 05 1. 20的清膏，噴霧干燥成干膏粉，備用。
12.根據權利要求10所述的制備方法，其特征在于所述的步驟O)中，將藥液濃縮時，濃縮成60°C熱測其相對密度為1. 30 1. 32的稠膏，干燥成干膏，再粉碎成細粉，備用。
13.權利要求1-5中任何一項的藥物組合物用于制備治療慢性腎炎的藥物或藥劑的用途。
全文摘要
本發明公開了一種藥物組合物，由以下重量份配比的原料藥材制成絡石藤10-25份，僵蠶1-10份，水蛭0.5-6份，魚腥草10-30份，萆薢5-25份，水紅花子5-25份，黃芪5-25份，土牛膝2-20份；該藥物組合物治療慢性腎炎效果明確、安全無毒副作用，且不易復發；本發明還公開了上述藥物組合物的制備方法和用途。
文檔編號A61K36/8945GK102512568SQ20111045942
公開日2012年6月27日 申請日期2011年12月31日 優先權日2011年12月31日
發明者劉玉寧, 蔡輝 申請人:湖南明瑞制藥有限公司