專利名稱：：綠原酸在制備治療小細胞肺癌的藥物中的用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及綠原酸的新用途，具體地來說，是綠原酸在制備治療小細胞肺癌的藥物中的用途。
背景技術：
：肺癌的發病率和死亡率居惡性腫瘤之首，嚴重威脅人類生命健康。現代醫學認為，肺癌是一種由細胞突變所致的克隆性疾病，在肺癌組織中，通常有一種惡性細胞占主要地位。從生物學行為的角度可將其分為小細胞肺癌(smallcelllungcancer，SCLC)和非小細胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)兩種主要類型，其中SCLC約占15%20%。SCLC和NSCLC不僅在染色體、基因、細胞表面標記等細胞分子水平存在顯著差異，在病理特征方面也存在顯著差異。具體差異如下一、細胞分子水平差異1.染色體變異肺癌中已報道多種染色體畸變，包括整條染色體和部分染色體的丟失等，在SCLC染色體畸變主要發生在lp、3p、5q、6q、8q、13q和17p。和非小細胞肺癌NSCLC相比較而言，SCLC常常表現出3p、5q、13q和17p，其中最為常見的的染色體畸變是3p的丟失。2.基因異常表達或缺失myc原癌基因的表達產物是一種核DNA結合蛋白，參與調節基因的轉錄和調控細胞的增殖、凋亡和分化。myc基因異常表達的頻率在NSCLC較低，而在SCLC中則存在差異，其表達的增高則SCLC的預后較差。BCL家族蛋白是細胞程序性死亡或凋亡中重要的調控子，是細胞死亡的負調控子，它通過延長細胞的生存期來抑制細胞的凋亡。BCL在SCLC中的表達遠比NSCLC高，BCL表達在抑制細胞凋亡的同時，也可增加腫瘤細胞對一些抗癌藥物的耐受性。SCLC易產生耐藥性與該基因的過表達有關。Rb基因的缺失或改變，在NSCLC和SCLC中有很大不同，超過卯。/。的SCLC中Rb基因的缺失或改變，而在NSCLC中僅占15。/。，Rb基因的缺失或改變與癌癥預后不良密切相關。3.細胞表面標記SCLC細胞表面表達的經典分子之一是神經粘附分子(NCAM)，粘附分子在細胞與細胞間、細胞與細胞外基質聯系中發揮著重要作用。并且，在異常狀態下，對于細胞浸潤和轉移也發揮作用。一些研究表明100n/。的SCLC呈現NCAM抗體陽性，而僅9n/。的NSCLC與該抗體反應陽性。二、病理特征差異SCLC與NSCLC比較,腫瘤倍增時間短,惡性程度高，較早出現淋巴道轉移和侵入血管經血道廣泛轉移到身體遠處器官組織。對放射治療及/或抗癌藥物治療敏感度高，但易產生耐藥性。且由于常短期內復發,生存率低于NSCLC。正是由于上述SCLC與NSCLC的細胞分子水平和病理特征差異，因此全身化療為SCLC治療的重點。盡管80G/。90M的局限期與約70。/。的廣泛期患者接受細胞毒藥物化療后腫瘤得以緩解,但緩解期通常不持久(中位緩解期多為6至8個月),且高達95%的患者最終將因疾病復發或轉移而死亡。目前，無論局限期或廣泛期小細胞肺癌的主要治療模式均為聯合化療。根治性化療可以延長患者的生存期,即便對于伴有嚴重臟器功能損害的患者,姑息性化療也有助于緩解癥狀。因此開發高效低毒的化療藥物用于SCLC具有非常大的臨床意義。綜上所述，按生物學行為的角度區分兩種肺癌是相當重要的，因為這兩種類型的肺癌存在明顯差異，發病機理、治療方案是截然不同的。小細胞肺癌患者主要用放化療方法治療，外科治療對這種類型肺癌患者并不起主要作用。另一方面，外科治療主要適用于非小細胞肺癌患者。小細胞肺癌和非小細胞肺癌，相互之間不存在可推導性。另外，大多數藥物對不同類別的腫瘤細胞的作用是有一定的專屬性，如臨床常見的紫杉醇在治療肺癌時是針對非小細胞癌(勞永聰，紫杉醇治療非小細胞肺癌毒副作用的觀察與護理，醫學文選2006第二期)，但沒有文獻報道公開紫杉醇對小細胞癌也有功效；吉林柳河方大制藥有限公司生產的"參蟾消解膠囊"中藥抗癌藥的功能主治為肺腺癌[見"參蟾消解膠囊"說明書]，肺腺癌屬于非小細胞癌類。綠原酸是廣泛存在于各種植物中的重要成分，與日常生活相關的植物包括葵花籽、水果(蘋果、梨、葡萄)、蔬菜(土豆)、大豆、小麥、可可豆、咖啡豆、沙棘果和傳統中草藥(杜仲、金銀花)均不同程度地含有綠原酸。目前報道的綠原酸用于治療肺癌的報道較多，如文獻CA143:166218:InhibitionofActivatorProtein-l,NF-B，andMAPKsandInductionofPhase2DetoxifyingEnzymeActivitybyChlorogenicAcid)披露了綠原酸體外抑制人癌癥細胞株A549的增值。所述癌癥細胞株A549屬于非小細胞癌中的肺腺癌。文獻CA100:79562:Protectiveeffectsofellagicacidandotherplantphenolsonbenzo[a]pyrene畫inducedneoplasiainmice.披露了綠原酸(5xl00mg/kg，靜脈注射)抗苯并[a]芘(100mg/kg)導致的肺癌。經査閱該文獻，認為文獻中表現的也是非小細胞癌中的肺腺癌(pulmonaryadenoma)。文獻CA141:224381:Invitroantioxidativeeffectsandtyrosinaseinhibitoryactivitiesofsevenhydroxycinnamoylderivativesingreencoffeebeans.披露了從叻卩啡豆中提取得至lj的7種羥基苯丙稀衍生物經鑒定其中有綠原酸。這些提取物對MCF7和WI38有抗增值作用。其中MCF7為人乳腺癌細胞株，WI38人胚肺成纖維細胞也屬非小細胞癌。文獻TSNAs的形成、影響因素、分析及清除方法綜述，煙草科技/煙草化學，2004(7):27-30)披露了TSNAs是一種致癌物質，與肺癌產生有關。綠原酸是TSNAs的抑制劑。間接說明綠原酸的抗肺癌作用。但是文獻所闡述的TSNAs為廣義的致癌物質，涉及的肺癌也是一個廣義概念，或者說是一個肺癌的上位概念，而且不能說明綠原酸對肺癌的直接作用。綜上所述，現有文獻均披露的綠原酸對肺癌的作用一方面局限于非小細胞肺癌，沒有綠原酸治療小細胞肺癌的相關報道。
發明內容本發明的技術方案是提供了綠原酸的新用途，具體地，是在制備治療小細胞肺癌的藥物中的用途。本發明提供了綠原酸Chlorogenicacid在制備治療小細胞肺癌的藥物中的用途。本發明還提供了一種治療肺癌的藥物組合物，它是以有效量的綠原酸為活性成分，加上藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。其中，所述的藥劑中每制劑單位含有綠原酸1—3000mg。其中，所述的藥劑是口服制劑、注射制劑。雖然文獻報道綠原酸能夠在體外抑制人癌癥細胞株A549的增值的非小細胞肺癌屬，但小細胞肺癌和非小細胞肺癌是屬于肺癌中的兩種不同的類型，是不同的適應癥。因此，不能推之具有綠原酸具有抑制小細胞肺癌的功效。小細胞肺癌和非小細胞肺癌在病因學、種系發生學、組織病理學和臨床方面有著明顯的不同。小細胞肺癌(SCLC)在肺癌中所占的比例約2025%，據近年流行病學資料顯示該類型已有下降的趨勢。SCLC由肺Kulchitsky細胞惡變而來，WHO將其又分為燕麥細胞型、中間細胞型和混合細胞型三種。該病男性多發于女性；發病部位以大支氣管(中心型)居多。臨床特點為腫瘤細胞倍增時間短，進展快，常伴內分泌異?；蝾惏┚C合征；由于患者早期即發生血行轉移且對放化療敏感，故小細胞肺癌的治療都采全身化療為主，聯合放療和手術為主要治療手段，藥物治療手段不多。本發明綠原酸對小細胞肺癌有抑制功效，能替代部分放化療，減輕患者可以因放化療引起的不適反應，是治療小細胞肺癌的新的藥物治療手段和選擇。發明的具體實施方式實施例1制備氯化鈉0.9%的靜脈注射用注射液處方一純度大于95%的綠原酸l.Og枸櫞酸l.Og枸櫞酸鈉0.5g氯化鈉18g注射用水2000ml按注射劑的常規操作共制成2ml的注射劑1000支，每支含綠原酸l毫克處方二純度大于95%的綠原酸3000g氯化鈉4500g注射用水_500000ml_按注射劑的常規操作共制成500ml的注射劑1000瓶，每瓶含綠原酸3克防止綠原酸水解的穩定劑如環糊精包合物、表面活性劑(陰離子表面活性劑、陽離子表面活性劑、兩性離子表面活性劑、非離子表面活性劑)?？寡趸瘎﹣喠蛩徕c、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、抗壞血酸、生理可用的pH值調節劑檸檬酸、富馬酸、谷氨酸、L-天冬氨酸、乳酸、乳糖酸、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、抗壞血酸、鹽酸、醋酸。實施例2含氯化鈉的無菌粉針劑處方一純度大于95%的綠原酸無菌粉l.Og氯化鈉無菌粉__按無菌粉針劑的常規操作共制成2ml粉針劑1000支，每支含綠原酸1毫克處方二純度大于95%的綠原酸無菌粉3000g氯化鈉無菌粉__按無菌粉針劑的常規操作共制成5ml粉針劑1000支，每支含綠原酸3克將實施例1各配方產品經凍干設備冷凍干燥制得綠原酸氯化鈉的無菌凍干粉針劑。實施例3綠原酸的5%葡萄糖靜脈注射用注射液處方一綠原酸(純度大于95%)2.0g枸櫞酸l.Og枸櫞酸鈉0.5g葡萄糖100g注射用水2000ml按注射劑的常規操作共制成2ml的注射劑1000支，每支含綠原酸2毫克處方二綠原酸(純度大于95%)葡萄糖注射用水20000ml1500g1000g按注射劑的常規操作共制成20ml的注射劑1000支，每支含綠原酸1.5克處方三按注射劑的常規操作共制成500ml的注射劑1000瓶，每瓶含綠原酸3克綠原酸的純度大于95%。防止綠原酸水解的穩定劑如環糊精包合物、表面活性劑(陰離子表面活性劑、陽離子表面活性劑、兩性離子表面活性劑、非離子表面活性劑)抗氧化劑亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、抗壞血酸、半胱氨酸。生理可用的pH值調節劑檸檬酸、富馬酸、谷氨酸、L-天冬氨酸、乳酸、乳糖酸、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、抗壞血酸、鹽酸、醋酸。實施例4綠原酸片劑綠原酸(純度大于95%)葡萄糖注射用水3000g25000g500000ml處方--:綠原酸(純度大于95%)l.OOg填充劑180.00g崩解劑10.00g黏合劑6.00g潤滑劑3.00g共計__200.00g按片劑常規方法制備，共制成1000片，每片含綠原酸lmg。綠原酸(純度大于95%)100.00g填充劑170.00g崩解劑15.00g黏合劑10.00g潤滑劑5.00g共i十_300.00g按片劑常規方法制備，共制成1000片，每片含綠原酸100mg。處方三綠原酸(純度大于95%)300.00g填充劑155.00g崩解劑20.00g黏合劑15.00g潤滑劑lO.OOg共計__500.00g按片劑常規方法制備，共制成1000片，每片含綠原酸300mg。綠原酸的純度大于95%。填充劑如淀粉、糊精、糖粉、預膠化淀粉、乳糖、葡萄糖、微晶纖維素、碳酸鈣、硫酸鈣、碳酸氫鈣。黏合劑如羥丙甲纖維素、聚維酮、淀粉漿、糊精漿、糖漿、膠槳、海藻酸鈉、聚乙二醇、桃膠、阿拉伯膠。崩解劑如交聯羧甲基纖維素鈉、交聯聚維酮、羧甲淀粉鈉、羥丙基淀粉、低取代羥丙基纖維素、梓檬酸、酒石酸、酸酐、碳酸氫鈉、碳酸鈉。潤滑劑如硬脂酸鎂、滑石粉、微粉硅膠、液體石蠟、聚乙二醇。實施例5綠原酸膠囊劑處方一綠原酸(純度大于95%)1.00g填充劑184.00g黏合劑5.00g潤滑劑lO.OOg共計200.00g按膠囊劑常規方法制備，共制成1000粒膠囊，每粒膠囊含綠原酸lmg。處方二綠原酸(純度大于95%)100.00g填充劑85.00g黏合劑5.00g潤滑劑lO.OOg共計200.00g按膠囊劑常規方法制備，共制成1000粒膠囊，每粒膠囊含綠原酸lOOmg。處方綠原酸(純度大于95%)300.00g填充劑85.00g黏合劑5.00g潤滑劑lO.OOg共計400.00g按膠囊劑常規方法制備，共制成1000粒囊，每粒膠囊含綠原酸300mg。綠原酸的純度大于95%。填充劑如淀粉、糊精、糖粉、預膠化淀粉、乳糖、葡萄糖、微晶纖維素、碳酸鈣、硫酸朽、碳酸氫鈣。黏合劑如羥丙甲纖維素、聚維酮、淀粉漿、糊精漿、糖漿、膠漿、海藻酸鈉、聚乙二醇、桃膠、阿拉伯膠。潤滑劑如硬脂酸鎂、滑石粉、微粉硅膠、液體石蠟、聚乙二醇。以下通過藥效學試驗證明本發明的有益效果。試驗例l綠原酸體外抗腫瘤細胞作用的實驗下述試驗從小細胞肺癌和非小細胞肺癌兩個類別方面進行了體外實驗證明了綠原酸具有的治療肺癌的作用，更全面和完整地說明了綠原酸能治療小細胞肺癌。一、藥物及主要試劑耗材1、綠原酸粉劑，純度99.6%，由四川大學藥學院提供，分子量354。2、培養基及試劑培養基RPML1640(Gibco公司)，小牛血清(蘭州民海)，青霉素(華北制藥股份有限公司，批號E0509104)、硫酸鏈霉素(華北制藥股份有限公司，批號No細302)，MTT(Sigma公司)。3、培養器皿96孔培養板，培養瓶(BD公司)。4、儀器日本SANYO二氧化碳細胞培養箱，Olympus1X70倒置相差熒光顯微鏡，美國NUAIRE生物安全柜，p-Quant微孔板測定儀(BioTek公司)。5、細胞株人肺腺癌(SP-CA-1);人小細胞肺癌(NCIH446)。從中科院上海細胞庫和ATCC引進，實驗室保存。二、實驗歩驟(一)藥物及試劑配制1、綠原酸的配制綠原酸粉劑用超純水(18.2MQ/cm水質，Millipore-Q制備)溶解配成6.4mg/ml的儲存濃度，經0.22pmMillipore無菌過濾頭無菌過濾除菌。2、培養液配置RPML1640粉劑溶解于超純水中，攪拌溶解，力n2.2gNaHC03、10mMHEPES攪拌溶解，加青霉素100U/ml、鏈霉素100|ug/ml，充分混合后0.22pm濾膜無菌過濾，分裝-20'C凍存，此為基礎培養基。臨用前37'C水浴解凍，加10%的小牛血清，調整培養液pH為7.27.4，此為完全培養基。3、CellProliferationReagent(WST-1)(Roche11644807001)按要求冷藏。(二)細胞復蘇及接種1、細胞復蘇將凍存細胞株從-152"C超低溫冰柜中取出，4(TC水浴解凍，離心用基礎培養基洗滌后用完全培養基懸浮細胞，轉移到細胞培養瓶內，靜置于37"C、5%C02的飽和濕度的細胞培養箱中培養，每23天換液。細胞生長鋪滿細胞瓶后用0.25%胰蛋白酶消化傳代培養直實驗所需細胞數量。2、消化細胞接種孔板取對數生長期細胞，0.25%胰蛋白酶消化、用基礎培養基離心洗滌1000rpm5min兩次，用完全培養基懸浮細胞并調整細胞濃度為6xl0Vml，接種細胞于%孔板內，每孔50pl(細胞數量3><103/孔)。接種孔數以每個藥物濃度3個復孔接種，并設正常對照組(腫瘤細胞+完全培養基)，接種培養后次日細胞貼壁后加藥。設定空白對照組(完全培養基+實驗終止前同步加等量WST-l)(三)加藥按以下分組加藥，靜置培養48小時，加藥48小時后終止前4小時加WST-1，H-Quant微孔板測定儀(BioTek公司)測定440nm波長的光吸收值。1、綠原酸組加藥前用完全培養基將6.4mg/ml儲存濃度的綠原酸配制成256pg/ml的藥物濃度，然后按兩倍稀釋法逐步稀釋；每個濃度取50pl2倍終濃度的綠原酸到己接種細胞的有50pl培養基的相應孔板中，綠原酸終濃度即為128、64、32、16、8、4、2禾卩lpg/ml。2、正常對照組設腫瘤細胞正常對照組孔與上述同步實驗。3、空白對照組每孔加等量完全培養基，3個復孔。實驗終止前同歩加等量WST-1并同步測定。4、37°C、5%(:02飽和濕度靜置培養48小時。比色測定實驗結束前4小時，在上述3個實驗組和正常對照組孔板內每孔加10)^1WST-1溶液，置37"C細胞培養箱繼續孵育，于加樣后2、4hr在)i-Quant微孔板測定儀(BioTek公司)上測定不同藥物組和正常對照孔的440nm波長光吸收值。96孔對應濃度及數據見表1:表1綠原酸體外作用肺癌細胞的測定值<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>三實驗結果根據表一測定結果，按公式(1)計算不同濃度綠原酸對人肺腺癌(SP-CA-1);人小細胞肺癌(NCIH446)的抑制率。抑制率％=a-ODg,—0/)基質)xioo......i0^正常值_。"基質計算結果見表2。表2不同濃度綠原酸對肺癌NCIH446和SP-CA-1的抑制結果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>結論綠原酸體外抑瘤實驗證明，綠原酸高濃度時對人患肺腺癌(SP-CA-1)和小細胞肺癌(NCIH446)有抑制作用。上述試驗證明，本發明綠原酸對小細胞肺癌有抑制功效，能替代部分放化療，減輕患者可以因放化療引起的不適反應，是治療小細胞肺癌的新手段。權利要求1、綠原酸Chlorogenicacid在制備治療小細胞肺癌的藥物中的用途。2、一種治療肺癌的藥物組合物，它是以有效量的綠原酸為活性成分，加上藥學上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。3、根據權利要求2所述的藥物組合物，其特征在于所述的藥劑中每制劑單位含有綠原酸1—3000mg。4、根據權利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于所述的藥劑是口服制劑、注射制劑。全文摘要本發明提供了綠原酸Chlorogenicacid在制備治療小細胞肺癌的藥物中的用途。本發明綠原酸對小細胞肺癌有抑制功效，能替代部分放化療，減輕患者可以因放化療引起的不適反應，是治療小細胞肺癌的新的藥物治療手段和選擇。文檔編號A61P35/00GK101120938SQ20071014060公開日2008年2月13日申請日期2007年8月9日優先權日2006年8月9日發明者旭包,潔張,徐小平,易大朝申請人:四川九章生物化工科技發展有限公司