專利名稱：硫代苯并咪唑衍生物的制作方法
技術領域：
本發明涉及由式(1)代表的硫代苯并咪唑衍生物，更準確地說，涉及用作人類食糜酶活性抑制劑的硫代苯并咪唑衍生物。
以上所述表明食糜酶活性抑制劑有希望成為對于呼吸器官疾病，如支氣管哮喘、炎性/變應性疾病如變應性鼻炎、特應性皮炎和蕁麻疹；循環器官的疾病，如硬化的血管損傷、血管內狹窄、外周循環紊亂、腎衰和心衰；骨/軟骨代謝疾病如類風濕性關節炎和骨關節炎等疾病的預防和/或治療藥物。
作為食糜酶活性抑制劑，已知三嗪衍生物(未審查的日本專利公布號8-208654)；乙內酰脲衍生物(未審查的日本專利公布號9-31061)；咪唑烷衍生物(PCT申請WO 96/04248)；喹唑啉衍生物(PCT申請WO97/11941)；雜環酰胺衍生物(PCT申請WO 96/33974)等。然而，這些化合物的結構與本發明的化合物的結構是完全不同的。
另一方面，與本發明化合物有關的技術公開在U.S專利號5,124,336中。該說明書介紹了具有拮抗血栓烷受體活性的硫代苯并咪唑衍生物。然而，該說明書沒有提及所述化合物抑制人類食糜酶的活性。
因此，本發明的目地是提供為潛在的和臨床上使用的人類食糜酶抑制劑的新的化合物。
本發明的公開因此，在廣泛研究后達到以上目的，本發明的申請者已經發現以下1-15組化合物，從而完成了本發明。
1．由以下式(1)代表的硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽(在下文中稱作“本發明的硫代苯并咪唑衍生物”) 其中R1和R2，同時或彼此獨立代表氫原子、鹵原子、三鹵甲基、氰基、羥基、有1-4個碳原子的烷基或有1-4個碳原子的烷氧基，或R1和R2一起形成-O-CH2-O-、-O-CH2-CH2-O-或-CH2-CH2-CH2-，其中碳原子可由一個或多個具有1-4個碳原子的烷基取代；A代表單鍵、取代或未取代的、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈亞烷基，取代或未取代的、有6-11個碳原子的亞芳基，或取代或未取代的、有4-10個碳原子的亞雜芳基(在環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)，其中取代基代表鹵原子、OH、NO2、CN、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基(所述取代基可在相鄰位置通過一個縮醛鍵互相連接)、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷硫基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基磺酰基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈酰基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈酰氨基、三鹵甲基、三鹵甲氧基、苯基、氧代基團或可由一個或多個鹵原子取代的苯氧基，其中所述取代基可在所述環或亞烷基的任何一個或多個位置上被獨立取代；E代表COOR3、SO3R3、CONHR3、SO2NHR3、四唑基、5-氧代-1,2,4-噁二唑基或5-氧代-1,2,4-噻二唑基，其中R3代表氫原子或有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；G代表取代或未取代的、直鏈或支鏈的、可被一個或多個O、S、SO2和NR3間斷的有1-6個碳原子的亞烷基，其中R3如上所定義，該取代基代表鹵原子、OH、NO2、CN、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈的烷基、有1-6個碳原子直鏈或支鏈的烷氧基(取代基可在相鄰位置通過縮醛鍵互相連接)、三鹵甲基、三鹵甲氧基、苯基或氧代基團；m代表0-2的整數；當m是0和A是取代或未取代的、直鏈或支鏈的、有1-6個碳原子的亞烷基時，則J代表取代或未取代的、有1-6個碳原子的直鏈、環狀或支鏈烷基，有7-9個碳原子的取代或未取代芳基，有10-11個碳原子的取代的芳基，取代或未取代的、有4-10個碳原子的雜芳基(在環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)；當m是0和A是有6-11個碳原子的取代或未取代亞芳基或者有4-10個碳原子的取代或未取代亞雜芳基(在環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)時，則J代表取代或未取代的、有1-6個碳原子的直鏈、環狀或支鏈烷基，有6-11個碳原子的取代或未取代芳基或有4-10個碳原子的取代或未取代的雜芳基(在環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)；或當m是0和A是單鍵或者當m是1或2時，則J代表取代或未取代的、有1-6個碳原子的直鏈、環狀或支鏈烷基，有6-11個碳原子的取代或未取代芳基，或有4-10個碳原子的取代或未取代雜芳基(在環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)，其中所述取代基代表鹵原子、OH、NO2、CN、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈的烷基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈的烷氧基(取代基可在相鄰位置通過縮醛鍵互相連接)、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷硫基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基磺酰基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈酰基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈酰氨基、取代或未取代的N-酰苯胺基、三鹵甲基、三鹵甲氧基、苯基、氧代基、COOR3基團或可由一個或多個鹵原子取代的苯氧基，其中取代基在所述環或亞烷基的一個或多個位置上獨立被取代；和X代表CH或氮原子。
2．硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽的特征在于，在上式(1)中，A是取代或未取代、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈亞烷基，有6-11個碳原子的取代或未取代亞芳基或者有4-10個碳原子的取代或未取代亞雜芳基(在環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)。
3．硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽的特征在于，在上式(1)中，A是有4-10個碳原子的取代或未取代亞雜芳基(在環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)。
4．硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽的特征在于，在上式(1)中，m是1。
5．硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽的特征在于，在上式(1)中，m是2。
6．硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽的特征在于，在上式(1)中，m是0,A是取代或未取代的、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈亞烷基，J是有7-9個碳原子的取代或未取代芳基，有10-11個碳原子的取代的芳基，或取代或未取代的、有4-10個碳原子的雜芳基(在環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)。
7．硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽的特征在于，在上式(1)中，m是0,A是有6-11個碳原子的取代或未取代亞芳基或者有4-10個碳原子的取代或未取代亞雜芳基(在該環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)，J是有6-11個碳原子的取代或未取代芳基或者有4-10個碳原子的取代或未取代雜芳基(在該環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)。
8．硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽的特征在于，在上式(1)中，G是-CH2-、-CH2-CH2-、-CH2CO-、-CH2CH2O-、-CH2CONH-、-CO-、-SO2-、-CH2SO2-、-CH2S-或-CH2CH2S-。
9．硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽的特征在于，在上式(1)中，R1和R2同時代表氫原子、鹵原子、有1-4個碳原子的烷基或有1-4個碳原子的烷氧基，或R1和R2各獨立代表氫原子、鹵原子、有1-4個碳原子的烷基、有1-4個碳原子的烷氧基、三鹵甲基、氰基或羥基。
10．硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽的特征在于，在上式(1)中，E代表COOH或四唑基。
11．硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽的特征在于，在上式(1)中，X代表CH。
12．硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上或接受的鹽的特征在于，具有抑制人類食糜酶的活性。
13．藥用組合物，其包含至少一種硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽和藥學上可接受的載體。
14．藥用組合物，它是對疾病的預防和/或治療劑。
15．預防和/或治療劑，其中所述疾病是炎性疾病、變應性疾病、呼吸器官疾病、循環器官疾病或骨/軟骨代謝疾病。
以上有關本發明式(1)化合物的取代基的定義如下R1和R2同時或每個單獨代表氫原子、鹵原子、三鹵甲基、氰基、羥基、有1-4個碳原子的烷基或有1-4個碳原子的烷氧基，或者R1和R2一起形成-O-CH2-O-、-O-CH2-CH2-O-或-CH2-CH2-CH2-，其中碳原子可由一個或多個有1-4個碳原子的烷基取代。作為有1-4個碳原子的烷基而言，可以提及甲基、乙基、(正，異-)丙基和(正、異、仲、叔-)丁基，優選甲基。優選R1和R2同時代表氫原子、氮原子、鹵原子、有1-4個碳原子的烷基或有1-4個碳原子的烷氧基，或者R1和R2各獨立代表氫原子、鹵原子、三鹵甲基、氰基、羥基、有1-4個碳原子的烷基或有1-4個碳原子的烷氧基。作為這里所用的鹵原子，可以提及氟原子、氯原子、溴原子等，優選氯原子和氟原子。作為有1-4個碳原子的烷基，可以提及甲基、乙基、(正、異-)丙基和(正、異、叔-)丁基，優選甲基。作為有1-4個碳原子的烷氧基，可以提及甲氧基、乙氧基、(正、異-)丙氧基和(正、異、仲、叔-)丁氧基，優選甲氧基。
A代表單鍵、取代或未取代的、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈亞烷基，有6-11個碳原子的取代或未取代亞芳基，或有4-10個碳原子的取代或未取代亞雜芳基(在該環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)。可以優選提及取代或未取代的、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈亞烷基，有6-11個碳原子的取代或未取代亞芳基，或有4-10個碳原子的取代或未取代亞雜芳基(在該環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)。作為取代或未取代的、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈亞烷基，可以提及亞甲基、亞乙基、(正、異-)亞丙基和(正、異、叔-)亞丁基，優選亞乙基。作為有6-11個碳原子的取代或未取代亞芳基，可以提及亞苯基、亞茚基和亞萘基等，優選亞苯基。作為有4-10個碳原子的取代或未取代亞雜芳基(在該環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)，可以提及亞吡啶基、亞呋喃基、亞噻吩基、亞咪唑基、亞噻唑基、亞嘧啶基、亞噁唑基、亞異噁唑基、benzphenylene、亞苯并咪唑基、亞喹啉基、亞吲哚基、亞苯并噻唑基等，優選亞吡啶基、亞呋喃基和亞噻吩基。
另外，作為這里所用的取代基，可以提及鹵原子、OH、NO2、CN、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基(其中該取代基可在相鄰位置上通過縮醛鍵互相連接)、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷硫基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基磺酰基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈酰基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈酰基氨基、三鹵甲基、三鹵甲氧基、苯基或可由一個或多個鹵原子取代的苯氧基。它們可在所述環或亞烷基的任何一個或多個位置上被獨立取代。可以特別提及OH、氯代基、溴代基、硝基、甲氧基、氰基、亞甲二氧基、三氟甲基、甲基、乙基、(正、異-)丙基、(正、異、叔-)丁基等。
作為E，可以提及COOR3、SO3R3、CONHR3、SO2NHR3、四唑基、5-氧代-1,2,4-噁二唑基或5-氧代-1,2,4-噻二唑基，優選COOR3或四唑基。作為在此使用的R3可以提及氫原子或直鏈或支鏈的有1-6個碳原子的烷基，優選氫原子、甲基、乙基或叔-丁基，最優選氫原子。
G代表取代或未取代的、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基(可被一個或多個O、S、SO2和NR3間隔，其中R3如上所定義)，所述取代基代表鹵原子、OH、NO2、CN、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基(所述取代基可在相鄰位置上通過縮醛鍵互相連接)、三鹵甲基、三鹵甲氧基、苯基或氧代基團。這里特別提及-CH2、-CH2CH2-、-CH2CO-、-CH2CH2O-、CH2CONH-、-CO-、-SO2-、-CH2SO2-、-CH2S-、-CH2CH2S-等，優選-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CO-或-CH2CH2O-。
m代表0-2的整數，優選0或2。
當m是0和A是取代或未取代的、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈亞烷基時，則J代表取代或未取代的、有1-6個碳原子的直鏈、環狀或支鏈烷基，取代或未取代的、有7-9個碳原子的芳基，有10-11個碳原子的取代芳基，取代或未取代的、有4-10個碳原子的雜芳基(在該環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)。優選有10-11個碳的取代芳基和取代或未取代的、有4-10個碳原子的雜芳基(在該環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)。作為取代或未取代的、有1-6個碳原子的直鏈、環狀或支鏈烷基，可以提及甲基、乙基、(正、異-)丙基、(正、異、仲、叔-)丁基、(正、異、新、叔-)戊基和環己基。作為有7-9個碳原子的取代或未取代芳基，可以提及茚基，作為有10-11個碳的取代芳基，可以提及萘基。作為有4-10個碳的取代或未取代的雜芳基(在該環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)，可以提及吡啶基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、嘧啶基、噁唑基、異噁唑基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、喹啉基、異喹啉基、喹喔啉基、苯并噁二唑基、苯并噻二唑基、吲哚基、N-甲基吲哚基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并異噁唑基等，優選苯并噻吩基或N-甲基吲哚基。
當m是0和A是取代或未取代的有6-11個碳原子的亞芳基，或取代或未取代的有4-10個碳原子的亞雜芳基(在該環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)時，則J代表取代或未取代的、有1-6個碳原子的直鏈、環狀或支鏈烷基，取代或未取代的、有6-11個碳原子的芳基，或取代或未取代的、有4-10個碳原子的雜芳基(在該環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)，優選取代或未取代的、有6-11個碳原子的芳基和取代或未取代的、有4-10個碳原子的雜芳基(在該環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)。作為取代或未取代的、有6-11個碳原子的芳基，可以提及苯基、茚基、萘基等，優選苯基或萘基。作為取代或未取代的、有1-6個碳原子的直鏈、環狀或支鏈烷基和作為取代或未取代的、有4-10個碳原子的雜芳基(在該環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)，可以提及以上所述的那些基團。作為這里所用的取代基，可以提及鹵原子、OH、NO2、CN、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基(該取代基可在相鄰位置上通過縮醛鍵互相連接)、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷硫基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基磺酰基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈酰基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈酰基氨基、取代或未取代的N-酰苯胺基、三鹵甲基、三鹵甲氧基、苯基或可由一個或多個鹵原子取代的苯氧基。它們可在所述環或烷基的任何一個或多個位置上被獨立取代。這里可以特別提及OH、氯代基、溴代基、硝基、甲氧基、氰基、亞甲二氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、甲基、乙基、(正、異-)丙基、(正、異、仲、叔-)丁基、N-酰苯胺基團等。
X代表CH或氮原子，優選CH。
作為式(1)化合物，優選在表1-40中特別敘述的那些化合物。它們中最優選的化合物的編號是37、50、63、64、65、84、115、117、119、121、123、130、143、147、168、174、256、264、272、311、319、320、321、324、349、352、354、355、358、364、380、392、395、398、401、402、444、455、459、460、506、863、866和869。
表1-40中所述的A1-A21和J1-J85是以下所示的基團，其中E和G如上所述。

表1

表2

表3

表4

表5

表6

表7

表8

表9

表10

表11

表12

表13

表14

表15

表16

表17

表18

表19

表20

表21

表22

表23

表24

表25

表26

表27

表28

表29

表30

表31

表32

表33

表34

表35

表36

表37

表38

表39

表40

可用以下所示合成方法(A)或(B)制備本發明的硫代苯并咪唑衍生物(1)，其中E是COOH和m是0合成方法(A) 其中Z代表鹵素、R1、R2、R3、A、G、J和X如上所定義。
因此，將2-硝基苯胺衍生物(a1)的硝基還原得到鄰苯二胺(a2)。使CS2與上述二胺反應生成化合物(a3)，使鹵化酯衍生物(a4)與(a3)反應得到(a5)。又使鹵化衍生物(a6)與其反應得到(a7)，水解(a7)得到本發明的苯并咪唑衍生物(a8)。
可在催化還原的標準條件下進行硝基的還原反應。例如，在催化劑如Pd-C的存在下，在室溫到100℃溫度下用氫氣進行反應。或者，也可采用在酸性條件下使用鋅或錫處理的方法，或在中性或堿性條件下用鋅粉的方法。
鄰苯二胺衍生物(a2)與CS2的反應，可用例如在J.Org.Chem.19:631-637,1954中或在J.Med.Chem.36:1175-1187,1993中所敘述的方法進行(ETOH溶液)。
硫代苯并咪唑(a3)和鹵化酯(a4)的反應可根據常規的S-烷基化條件進行，例如在堿如NaH、Et3N、NaOH或K2CO3存在下，在0℃-200℃溫度下，在攪拌下進行。
硫代苯并咪唑(a5)和鹵化衍生物(a6)的反應可根據常規的N-烷基化或N-酰化的條件，例如在堿如NaH、Et3N、NaOH或K2CO3存在下，在0℃-200℃溫度下，在攪拌下進行。
作為羧基保護基R3的消除反應，優選使用利用堿如氫氧化鋰或酸如三氟乙酸的水解方法。合成方法(B) 因此，2-硝基苯胺衍生物(a1)的氨基可用L保護得到(b1)。又使鹵化衍生物(a6)與其反應得到(b2)，從中使L脫保護得到(b3)。將(b3)的硝基還原得到鄰苯二胺衍生物(b4)。又使其與CS2反應得到化合物(b5)，使鹵化酯衍生物(a4)與其反應得到(a7)，水解(a7)得到本發明的苯并咪唑衍生物。或者，也可使未保護的2-硝基苯胺衍生物(a1)與鹵化衍生物(a6)或醛衍生物(b6)反應直接得到化合物(b3)。作為保護基L，可以提及三氟乙酰基、乙酰基、叔丁氧基羰基、芐基等。2-硝基苯胺衍生物(a1)和醛衍生物(b6)的反應可根據常規的還原胺化條件，用還原劑如復合氫化物，例如LiAIH4、NaBH4、NaB3CN、NaBH(OAc)3等或乙硼烷，在溶劑如乙醇、甲醇和二氯甲烷中，在0℃-200℃溫度下進行。其它反應可如合成方法(A)進行。
可通過以下所示的合成方法(C)制備本發明的硫代苯并咪唑衍生物(1)，其中E是COOH,m是0和G是酰胺鍵合成方法(C) 其中Q代表亞甲基、亞苯基等，Z代表鹵素。R1、R2、R3、A、J和X如上所定義，條件為R3是保護基團如乙基、甲基等，在酸中不活潑。
因此，使叔丁基酯鹵化衍生物(c1)與硫代苯并咪唑化合物(a5)反應得到化合物(c2)，將其在酸性條件下水解得到產物(c3)。又與胺衍生物(c4)反應得到(c5)，將其水解得到本發明的苯并咪唑衍生物。
縮合酰胺化可用常規方法、用縮合劑進行。作為縮合劑，可以提及DCC、DIPC、EDC=WSCI、WSCI·HCl、BOP、DPPA等，這些縮合劑可單獨使用或與HONSu、HOBt、HOOBt等聯合使用。該反應可在合適的溶劑如THF、氯仿、叔丁醇等中，在0℃-200℃溫度條件下進行。其它反應可如合成法(A)進行。
可通過以下所示合成法(D)制備本發明的硫代苯并咪唑衍生物(1)，其中E是COOH,m是0和G是醚鍵合成法(D) 其中Z代表鹵素，R1、R2、R3、A、J和X如上所定義。
因此，使硫代苯并咪唑化合物(a5)與例如鹵化醇衍生物(d1)反應得到化合物(d2)。又與酚衍生物(d3)反應得到產物醚(d4)，將其水解得到的本發明的苯并咪唑衍生物(a8)。
醚化反應可用膦化合物如三苯基膦和三丁基膦和偶氮化合物如DEAD和TMAD，在合適的溶劑如N-甲基嗎啉和THF中，在0℃-200℃溫度下，在Mitsunobu反應或其相關的反應中進行。其它反應可如合成法(A)進行。
可通過以下所示合成法(E)制備本發明的硫代苯并咪唑衍生物(1)，其中E是四唑和m是0合成法(E) 其中R1、R2、A、G、J和X如上所定義。
使腈(e1)與各種可轉化的疊氮(azi)化合物反應得到四唑(e2)。
作為疊氮化合物，可以提及疊氮化三烷基錫例如疊氮化三甲基錫和疊氮酸或其銨鹽。當使用有機錫疊氮化物時，相對于化合物(e1)使用1-4倍摩爾量。當用疊氮酸或其胺鹽時，相對于化合物(e1)使用1-5倍摩爾量的疊氮化鈉或叔胺如氯化銨和三乙胺。每個反應可在0℃-200℃溫度下，在溶劑如甲苯、苯和DMF中進行。
可通過以下所示合成法(F)制備本發明的硫代苯并咪唑衍生物(1)，其中m是1或2合成法(F) 其中R1、R2、R3、A、G、J和X如上所定義。
因此，可以使硫代苯并咪唑化合物(a7)與過氧化物在合適的介質中反應得到亞砜衍生物(f1)和/或砜衍生物(f2)。作為所使用的過氧化物，可以提及過苯甲酸、間氯過苯甲酸、過乙酸、過氧化氫等，作為所用的溶劑，可以提及氯仿、二氯甲烷等。化合物(a7)與所使用的過氧化物的比率選自(但不限于)合適的范圍，例如一般可優選使用1.2-5倍摩爾量。每個反應一般在大約0℃-50℃，優選0℃到室溫下進行，一般在大約4-20小時內完成。
如果需要，可將本發明的苯并咪唑衍生物轉化為醫學上可接受的、無毒的陽離子鹽。作為此類鹽，可以提及堿金屬離子如Na+和K+；堿土金屬離子如Mg2+和Ca2+；金屬離子如Al3+和Zn2+或有機堿如氨、三乙胺、1,2-乙二胺、丙二胺、吡咯烷、哌啶、哌嗪(pireradine)、吡啶、賴氨酸、膽堿、乙醇胺、N,N-二乙基乙醇胺、4-羥基哌啶、葡糖胺和N-甲基葡糖胺。其中優選Na+、Ca2+、賴氨酸、膽堿、N,N-二甲基乙醇胺和N-甲基葡糖胺。
本發明的苯并咪唑衍生物抑制人類食糜酶活性。準確地說，它們的IC50不大于1000，優選不小于0.01和低于1000，更優選不小于0.05和低于500。對人類食糜酶具有極好的抑制作用的本發明苯并咪唑衍生物，可用作許多疾病的臨床上的預防和/或治療藥物。
本發明的苯并咪唑衍生物可與藥學上可接受的載體一起作為藥用組合物，制備成各種劑型后經口服或腸胃外途徑給藥。作為腸胃外給藥，可經靜脈內、皮下、肌內、經皮、直腸、經鼻和滴眼給藥。
所述藥用組合物的劑型包括以下類型。例如，在口服給藥的情況下，可以提及片劑、丸劑、顆粒劑、粉劑、溶液、懸浮液、糖漿和膠囊。
這里所用的片劑可用常規方法，用藥學上可接受的載體如賦形劑、粘合劑和崩解劑制備。丸劑、顆粒劑和粉劑也可用常規方法，用賦形劑等制備。溶液、懸浮液和糖漿可用常規方法，用甘油酯、醇、水、植物油等制備。膠囊可通過將顆粒、粉劑和溶液裝填進由明膠等制成的膠囊中來制備。
在所述胃腸外制劑中，用于靜脈內、皮下和肌內給藥的腸胃外制劑可注射給藥。作為注射劑，可將苯甲酸衍生物溶解于水溶性液體如生理鹽水中或含有有機酯如丙二醇、聚乙二醇和植物油的非水溶性液體中。
在經皮給藥的情況下，可使用如軟膏和乳膏的劑型。軟膏通過將苯甲酸衍生物與脂肪或脂質、凡士林等混合制備，乳膏可通過將苯甲酸衍生物與乳化劑混合制備。
在直腸給藥的情況下，可用明膠軟膠囊制備成栓劑。
在經鼻給藥的情況下，可用含有液體或粉劑組合物的制劑。作為液體制劑的基質，可使用水、鹽水、磷酸鹽緩沖液、乙酸鹽緩沖液等，另外可包含表面活性劑、抗氧化劑、穩定劑、防腐劑和增稠劑。作為粉劑的基質，可以提及易溶于水的聚丙烯酸鹽、纖維素的低烷基醚、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、直鏈淀粉、支鏈淀粉酶等(它們是吸水性的)，或纖維素、淀粉、蛋白、樹膠、交聯乙烯基聚合物等(它們幾乎不溶于水)，優選吸水性的。或者可將其混合使用。另外，對于粉劑而言，可加入抗氧化劑、色料、防腐劑、消毒劑、矯正劑等。這類液體制劑和粉制劑可以使用例如噴霧裝置等給藥。
對于滴眼給藥而言，可使用作為水或非水的滴眼液。對于含水的滴眼液，可用無菌純凈水、生理鹽水等作為溶劑。當無菌純凈水作為溶劑時，可加入懸浮劑如表面活性劑和聚合物增稠劑以便制備含水滴眼懸浮液。或者，可加入加溶劑如非離子表面活性劑以制備可溶的滴眼溶液。非水性滴眼液可用非水性溶劑(用于注射劑的溶劑)，用作非含水滴眼液。
用于眼部的制劑可通過制備滴眼液以外的其它方法制備，可以使用眼膏、敷用液、撒布粉和嵌入物。
對于鼻腔或口腔吸入而言，它們是作為本發明的苯并咪唑衍生物與常用的藥用賦形劑的溶液或懸浮液一起吸入，例如，使用用于吸入的氣溶膠噴霧等。或者，以凍干粉制劑形式的本發明的苯并咪唑衍生物可用吸入裝置(可以直接接觸肺)給藥到肺部。
根據需要，可以向這些不同的制劑中加入藥學上可接受的載體，如等滲劑、防腐劑、消毒劑、潤濕劑、緩沖劑、乳化劑、分散劑、穩定劑等。
為了滅菌，可以向這些制劑中摻入抗菌劑、經滯留細菌的過濾器過濾處理、加熱、輻照等。或者，可制備成無菌的固體制劑，在臨用前將其溶解或懸浮在合適的無菌溶液中。
本發明的苯并咪唑衍生物的劑量，根據疾病的類型、給藥途徑、病人的狀況、年齡、性別、體重等而定，但口服一般劑量是大約1-500mg/天/病人，優選1-300mg/天/病人。腸胃外給藥如靜脈內、皮下、肌內、經皮、直腸、鼻腔、滴眼和吸入給藥，劑量大約為0.1-100mg/天/病人，優選0.3-30mg/天/病人。
當本發明的苯并咪唑衍生物作為預防劑使用時，可根據已知的方法依每個病人的狀況給藥。
作為本發明的預防和/或治療劑所適應的疾病，可以提及例如呼吸器官的疾病如支氣管哮喘，炎性/變應性疾病如變應性鼻炎、特應性皮炎和蕁麻疹；循環器官的疾病如硬化性血管損傷、血管內狹窄、外周循環障礙、腎衰竭和心衰竭；骨/軟骨代謝疾病如類風濕性關節炎和骨關節炎。
向2-((5,6-二甲基-1-(1-萘甲基)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(23mg,0.08mmol)的四氫呋喃(1ml)和甲醇(0.5ml)溶液中加入4N氫氧化鈉水溶液(0.25ml)。在室溫下攪拌5小時后，加入6N鹽酸以便終止該反應，隨后用乙酸乙酯萃取。用飽和鹽水洗滌乙酸乙酯層并用無水硫酸鈉干燥。在減壓下蒸發溶劑得到標題化合物(24mg，定量收率)。
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。
計算值M=452.16，實測值(M+H)+=453.2
表41

表42

表43

表44

表45

實施例3．第547號化合物的制備將三乙胺(276μl,1.98mmol)和2-(溴乙基)苯甲酸叔丁酯(538mg,1.99mmol)加入到5,6-二甲基苯并咪唑-2-硫醇(236mg,1.32mmol)的2ml二甲基甲酰胺溶液中，并將其在80℃下攪拌3小時。當反應完成后加入水，隨后用乙酸乙酯萃取。經無水硫酸鈉干燥乙酸乙酯層后濃縮，經硅膠柱層析(己烷∶乙酸乙酯=3∶1)純化殘留物得到2-((5,6-二甲基苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸叔丁酯(288mg，產率59％)。
將2-((5,6-二甲基苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸叔丁酯(30mg,0.082mmol)溶于3ml氯仿中，向其中順序加入三乙胺(17μl,0.123mmol)和苯甲酰氯(14μl,0.123mmol)，在室溫下將該混合物攪拌2小時。當反應完成后加入水，隨后用乙酸乙酯萃取。經無水硫酸鈉干燥乙酸乙酯層后濃縮，得到2-((5,6-二甲基-1-(苯基羰基)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸叔丁酯(38mg，定量收率)。
將2-((5,6-二甲基-1-(苯基羰基)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸叔丁酯溶于1ml二氯甲烷中，向其中加入三氟乙酸(1ml)，并在室溫下將該混合物攪拌6小時。反應完成后，在減壓下蒸發溶劑并干燥過夜，得到標題化合物(33mg，定量收率)。
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。
計算值M=416.12，實測值(M+H)+=417.0實施例4．第561號化合物的制備以與工作實施例3類似的方法得到標題化合物。
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。
計算值M=452.09，實測值(M+H)+=453.2參考實施例4．3-(萘基甲基)咪唑并(5,4-b)吡啶-2-硫醇的制備向2-氨基-3-硝基吡啶(1680mg,12mmol)的二甲基甲酰胺(20ml)溶液中加入氫化鈉(75mg,0.55mmol)和1-氯代甲基萘(74μl,0.55mmol)。在80℃下攪拌所得溶液17小時后加入水，隨后用乙醚萃取。經無水硫酸鎂干燥乙醚層后濃縮，經硅膠柱層析(己烷∶乙酸乙酯=4∶1)純化殘留物得到萘基甲基(3-硝基(2-吡啶基))胺(903mg，產率27％)。
向萘基甲基(3-硝基(2-吡啶基))胺(900mg,3.2mmol)的乙醇(40ml)溶液中加入90.0mg的10％的Pd-C。將得到的溶液在氫氣氛下、在50℃溫度下攪拌8小時后，經硅藻土過濾除去Pd-C。將得到的溶液濃縮得到(3-氨基(2-吡啶基))萘基甲基胺(860mg，產率99％)。向所得的(3-氨基(2-吡啶基))萘基甲基胺(860mg,3.2mmol)的乙醇(20ml)溶液中加入二硫化碳(6.1ml,102mmol)。在攪拌下將所得溶液加熱至回流12小時后，將其放置在室溫下5小時。過濾沉積的沉淀物并用乙醇(5ml)洗滌三次。在80℃減壓下干燥5小時得到標題化合物(555mg，產率56％)。
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。
計算值M=291.08，實測值(M+H)+=292.3參考實施例5．3-((2,5-二甲基苯基)甲基)咪唑并(5,4-b)吡啶-2-硫醇的制備用與參考實施例4類似的方法合成標題化合物。
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。
計算值M=269.01，實測值(M+H)+=270.2實施例5．第256號化合物的制備以與參考實施例2類似的方法，用在參考實施例4中得到的3-(萘基甲基)咪唑并(5,4-b)吡啶-2-硫醇(30mg,0.1mmol)得到2-((3-(萘基甲基)咪唑并(5,4-b)吡啶-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(30mg，產率70％)。
以與實施例1類似的方法，將如此得到的2-((3-(萘基甲基)咪唑并(5,4-b)吡啶-2-硫代)甲基)苯甲酸甲酯(30mg,0.068mmol)水解，得到標題化合物(18.3mg，產率66％)。
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。
計算值M=425.12，實測值(M+H)+=426.1
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。
表46

表47

表48

實施例7．第264號化合物的制備將4-甲基-2-硝基苯胺(913mg,6mmol)溶于乙腈(18ml)中，向其中加入無水三氟乙酸(1.00ml,7.2mmol)并將該混合物回流1.5小時。冷卻至室溫后，在減壓下濃縮并干燥，得到4-甲基-2-硝基三氟乙酰苯胺(1.396g，產率94％)。
將4-甲基-2-硝基三氟乙酰苯胺(1.396g,5.63mmol)溶于二甲基甲酰胺(14ml)中，然后在室溫下順序加入碳酸鉀(940mg,6.80mmol)和1-氯代甲基萘(1.15g,6.51mmol)并加熱至100℃。1小時40分鐘后，加入5N氫氧化鈉水溶液(7.5ml)，實際上回流15分鐘。15分鐘后，將其冷卻至室溫并加入水(180ml)，在4℃下放置過夜。過濾沉淀的結晶并干燥得到((1-萘基)甲基)(4-甲基-2-硝基-苯基)胺(1.587g，產率96％)。
向(1-萘基)甲基)(4-甲基-2-硝基-苯基)胺(1.0021g,3.43mmol)溶液中加入乙醇(5ml)和1,4-二噁烷(5ml)，再加入2.058M氫氧化鈉水溶液(1ml)，在油浴中回流。15分鐘后，從油浴中移出，然后分批加入鋅粉(897mg,13.72mmol)。再在油浴中回流2小時。2小時后，在減壓下濃縮并溶于乙酸乙酯(50ml)中，用飽和的鹽水(25ml)洗滌兩次。經硫酸鎂干燥后，在減壓下濃縮并干燥得到((1-萘基)甲基)(2-氨基-4-甲基-苯基)胺(943.1mg)，為棕色的油。
隨后，將((1-萘基)甲基)(2-氨基-4-甲基-苯基)胺(943.1mg,3.59mmol)溶于乙醇(6.4ml)中，加入二硫化碳(7ml,116mmol)，然后回流。10小時后使其降至室溫，在減壓下濃縮。將乙醇(2ml)加入到殘余物中，在室溫下攪拌30分鐘，在冰上再攪拌30分鐘。過濾得到的結晶并干燥得到1-((1-萘基)甲基)-6-甲基-苯并咪唑-2-硫醇(459.1mg，產率44％,2步)。
將1-((1-萘基)甲基)-6-甲基-苯并咪唑-2-硫醇(431.1mg,1.42mmol)溶于二甲基甲酰胺(12ml)中，加入三乙胺(0.296ml,2.12mmol)和2-溴代甲基苯甲酸甲酯(390.1mg,1.70mmol)并加熱至80℃。5小時50分鐘后，加入三乙胺(0.296ml,2.12mmol)和2-溴代甲基苯甲酸甲酯(325mg,1.42mmol)并加熱1小時10分鐘。然后在減壓下濃縮并溶于乙酸乙酯(80ml)中，用水(30ml)洗滌兩次并經硫酸鎂干燥。在減壓下濃縮溶劑。將殘余物在乙酸乙酯-己烷中結晶得到410mg，經硅膠柱層析(己烷∶乙酸乙酯=6∶1)純化母液回收87mg相同組分的結晶，共有497mg2-((1-((1-萘基)甲基)-6-甲基-苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(產率78％)。
將2-((1-((1-萘基)甲基)-6-甲基-苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(497mg,1.098mmol)溶于甲醇(10ml)和四氫呋喃(10ml)中，向其中加入4N氫氧化鋰水溶液(6.86ml)。在室溫下攪拌2小時30分鐘后，加入飽和的檸檬酸水溶液(10ml)以便終止反應，減壓下將該混合物濃縮至溶劑量的1/3，將其溶于乙酸乙酯(80ml)中并用水(20ml)洗滌五次。在減壓下濃縮有機層后，將乙腈(10ml)加入到殘余物中，再在減壓下將其濃縮，濾出得到的結晶并干燥得到標題化合物(439.1mg，產率91％)。
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。
計算值M=438.14，實測值(M+H)+=439.3實施例8．第272號化合物的制備以與工作實施例7類似的方法得到標題化合物。
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。
計算值M=454.14，實測值(M+H)+=455.3實施例9．第65號化合物的制備將2-硝基苯胺(829mg,6mmol)和1-甲基吲哚甲醛(1242mg,7.8mmol)溶于20ml四氫呋喃中，順次加入乙酸(200μl)和NaBH(OAc)3(5087mg,24mmol)，在室溫下攪拌過夜。然后加入飽和碳酸氫鈉水溶液，隨后用乙酸乙酯萃取，經無水硫酸鈉干燥并蒸發溶劑。經硅膠柱層析(己烷∶乙酸乙酯=95∶5)純化后，得到((1-甲基吲哚-3-基)甲基)(2-硝基苯基)胺(264mg，產率18％)。
將((1-甲基吲哚-3-基)甲基)(2-氨基苯基)胺(264mg,0.939mmol)溶于乙醇(10ml)中，加入Pd-C(50mg,10％Pd,0.047mmol)，在氫氣氛中，在室溫下攪拌6小時。當反應完成后，濾出Pd-C并蒸發溶劑得到((1-甲基吲哚-3-基)甲基)(2-氨基苯基)胺(212mg，產率90％)。
將((1-甲基吲哚-3-基)甲基)(2-氨基苯基)胺(212mg,0.845mmol)溶于吡啶(1ml)中，加入二硫化碳(1ml,16.9mmol)。將該混合物在氮氣氛下回流1小時。將溶劑蒸發后，經硅膠柱層析(己烷∶乙酸乙酯=2∶1)純化得到((1-甲基吲哚-3-基)甲基)苯并咪唑-2-硫醇(96mg，產率39％)。
將氫化鈉(12mg,0.342mmol)和二甲基甲酰胺(2ml)加入到預先干燥的反應容器中。向該混合物中加入((1-甲基吲哚-3-基)甲基)苯并咪唑-2-硫醇(50mg,0.171mmol)和2-溴代甲基苯甲酸甲酯(59mg,0.257mmol)，然后將該混合物在60℃下攪拌1小時。加入水，隨后用乙酸乙酯萃取。經無水硫酸鈉干燥乙酸乙酯層后濃縮，經硅膠柱層析(己烷∶乙酸乙酯=2∶1)純化殘余物得到2-((1-((-甲基吲哚-3-基)甲基)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(54mg，產率74％)。
向溶于四氫呋喃(2ml)和甲醇(1ml)中的2-((1-((1-甲基吲哚-3-基)甲基)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(54mg,0.122mmol)的溶液中加入4N氫氧化鋰水溶液(0.5ml)。在室溫下攪拌過夜后，加入6N鹽酸使反應停止，隨后用乙酸乙酯萃取。用飽和的鹽水洗滌乙酸乙酯層后，用無水硫酸鈉干燥。在減壓下蒸發溶劑得到標題化合物(48mg，產率92％)。
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。
計算值M=427.14，實測值(M+H)+=428.2
向2-((1-((2-((叔-丁基)氧基羰基)苯基)甲基)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(248mg,0.51mmol)中加入4N鹽酸的二噁烷溶液(1.28ml,5.1mmol)，在室溫下攪拌過夜。蒸發溶劑后，在減壓下干燥得到2-((2-((2-(甲氧基羰基)苯基)甲基硫代)苯并咪唑基)甲基)苯甲酸(220mg,定量收率)。
將2-((2-((2-(甲氧基羰基)苯基)甲基硫代)苯并咪唑基)甲基)苯甲酸(180mg,0.42mmol)溶于氯仿(6ml)中，順次加入HOBT(68mg,0.504mmol)、苯胺(46μl,0.504mmol)、叔-丁醇(1.2ml)和EDCI(97mg,0.504mmol)，在室溫下攪拌過夜。加入水，隨后用二氯甲烷萃取。經無水硫酸鈉干燥后過濾，蒸發溶劑。經硅膠柱層析(己烷∶乙酸乙酯=3∶2)純化得到2-((1-((2-(N-苯基氨基甲酰基)苯基)甲基硫代)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(86mg，產率40％)。
向溶于四氫呋喃(2ml)和甲醇(1ml)中的如此得到的2-((1-((2-(N-苯基氨基甲酰基)苯基)甲基硫代)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(86mg,0.169mmol)溶液中加入4N氫氧化鋰水溶液(0.5ml)，在60℃下攪拌約2小時。加入6N鹽酸水溶液使反應停止，用乙酸乙酯萃取該溶液。用飽和的鹽水洗滌乙酸乙酯層后，經無水硫酸鈉干燥。在減壓下蒸發溶劑得到標題化合物(83mg，定量收率)。
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。
計算值M=493.15，實測值(M+H)+=494.2實施例12．以與工作實施例11類似的方法,用多種苯甲酸酯衍生物得到上表48中所示化合物。
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。實施例13．第619號化合物的制備將氫化鈉(400mg,10.0mmol)和二甲基甲酰胺(30ml)加入到預先干燥的反應容器中。向該混合物中加入2-(苯并咪唑-2-基硫代甲基)苯甲酸甲酯(1500mg,5.0mmol)和溴代乙酸鹽叔-丁酯(1463mg,7.5mmol)，將該混合物在80℃下攪拌2小時。加入水，隨后用乙醚萃取。用無水硫酸鈉干燥該醚層后濃縮，經硅膠柱層析(己烷∶乙酸乙酯=5∶1)純化殘余物，得到2-(2-((2-(甲氧基羰基)苯基)甲基硫代)苯并咪唑基)乙酸叔-丁酯(1298mg，產率63％)。
向2-(2-((2-(甲氧基羰基)苯基)甲基硫代)苯并咪唑基)乙酸叔-丁酯(1290mg,3.13mmol)中加入三氟乙酸(15ml)，在室溫下攪拌過夜。蒸發溶劑后，在壓減下干燥得到2-(2-((2-(甲氧基羰基)苯基)甲基硫代)苯并咪唑基)乙酸(715mg，產率64％)。
將2-(2-((2-(甲氧基羰基)苯基)甲基硫代)苯并咪唑基)乙酸(35mg,0.1mmol)溶于四氫呋喃(3ml)中，向其中加入苯胺(11.2mg,0.12mmol)和EDCI(23mg,0.12mmol)，然后將該混合物在室溫下攪拌過夜。然后加入水，隨后用乙酸乙酯萃取。經無水硫酸鈉干燥后過濾，蒸發溶劑。硅膠柱層析(己烷∶乙酸乙酯=3∶2)純化殘留物得到2-((1-((N-苯基氨基甲酰基)甲基)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲苯甲酯(27.5mg，產率64％)。
如工作實施例1中所述，將如此得到的2-((1-((N-苯基氨基甲酰基)甲基)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(20mg,0.046mmol)水解，得到標題化合物(6.9mg，產率36％)。
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。
計算值M=417.11，實測值(M+H)+=418.0
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。
表49

表50

表51

表52

參考實施例6．2-((1-(2-羥乙基)-5,6-二甲基苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯的制備向在參考實施例2中得到的、溶于二甲基甲酰胺中的2-((5,6-二甲基苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(326mg,1mmol)的溶液中加入碳酸鉀(207mg,1.5mmol)和2-溴代乙醇(150mg,1.2mmol)，將所得溶液在80℃下攪拌12小時。當反應完成后，用乙醚萃取并蒸發溶劑。經快速柱層析(己烷∶乙酸乙酯=4∶1)純化殘余物得到標題化合物(248mg,產率67％)。
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。
計算值M=370.14，實測值(M+H)+=371.2實施例15．第736號化合物的制備向溶于N-甲基嗎啉(3ml)中的2-((1-(2-羥乙基)-5,6-二甲基苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(45mg,0.23mmol)溶液中加入Pph3(62mg,0.24mmol)和DEAD(10.6ml,40％于甲苯中，0.24mmol)，在室溫下攪拌該混合物。10分鐘后，加入苯酚(11.3mg,0.12mmol)并將其在室溫下攪拌12小時。蒸發溶劑，經薄層層析(己烷∶乙酸乙酯=1∶1)純化殘余物得到2-((5,6-二甲基-1-(2-苯氧乙基)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(44mg，產率81％)。
以與實施例1類似的方法，使用2-((5,6-二甲基-1-(2-苯氧乙基)苯并咪唑-2-基硫代)甲基)苯甲酸甲酯(35mg,0.078mmol)，進行水解反應得到標題化合物(31mg，產率94％)。用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。
計算值M=432.15，實測值(M+H)+=433.2
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。
以與實施例1類似的方法，將其水解得到標題化合物(5.2mg，產率76％)。
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。
計算值M=440.12，實測值(M+H)+=441.3實施例18．第869號化合物的制備在冰上冷卻下，向溶于二氯甲烷(5ml)中的、在實施例2中得到的第37號化合物的酯(39mg,0.094mmol)的溶液中，加入50-60％間-氯過苯甲酸(64mg,0.374mmol)。在室溫下攪拌得到的溶液4小時后，倒入飽和的碳酸氫鈉溶液，用氯仿萃取得到的溶液。用水洗滌氯仿層后濃縮，經快速層析(己烷∶乙酸乙酯=5∶1)純化殘余物得到2-(((1-((2,5-二甲基苯基)甲基)苯并咪唑-2-基)磺酰基)甲基)苯甲酸甲酯(37mg，產率87％)。
以與實施例1類似的方法，水解2-(((1-((2,5-二甲基苯基)甲基)苯并咪唑-2-基)磺酰基)甲基)苯甲酸甲酯(64mg,0.14mmol)得到標題化合物(53mg，產率87％)。
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。
計算值M=434.13，實測值(M+H)+=435.2
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。實施例20．第952號化合物的制備向溶于二甲基甲酰胺(10ml)中的5,6-二甲基苯并咪唑-2-硫醇(713mg,4mmol)中加入三乙胺(836μl,6mmol)和z-溴代甲基芐腈(1176mg,6mmol)。在80℃下攪拌過夜后，向混合物中加入水，隨后用乙酸乙酯提取。用無水硫酸鈉干燥乙酸乙酯層后濃縮，經硅膠柱層析(己烷∶乙酸乙酯=3∶2)純化殘余物得到2-((5,6-二甲基苯并咪唑-2-基硫代)甲基)芐腈(benzenecarbonitrile)(1159mg，產率99％)。
將氫化鈉(178mg,4.90mmol)和四氫呋喃(30ml)加入到預先干燥的容器中。向該混合物中加入2-((5,6-二甲基苯并咪唑-2-基硫代)甲基)芐腈(719mg,2.45mmol)和2,5-二氯代芐基氯(543μl,4.90mmol)，在60℃下將該混合物攪拌40分鐘。加入水隨后用乙酸乙酯萃取。經無水硫酸鈉干燥乙酸乙酯層后濃縮，用硅膠柱層析(己烷∶乙酸乙酯=3∶1)純化殘余物得到2-((1-((2,5-二甲基苯基)甲基)-5,6-二甲基苯并咪唑-2-基硫代)甲基)芐腈(370mg，產率37％)。
將2-((1-((2,5-二甲基苯基)甲基)-5,6-二甲基苯并咪唑-2-基硫代)甲基)芐腈(165mg,0.401mmol)溶于甲苯(3ml)中，向其中加入Me3SnN3(124mg,0.602mmol)，在氮氣氛下回流過夜。當反應完成后，蒸發溶劑，經硅膠柱層析(二氯甲烷∶甲醇=19∶1)純化殘余物得到標題化合物(75mg，產率41％)。
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。
計算值M=454.19，實測值(M+H)+=455.2
用LC-MS鑒定分子量確定該化合物。實施例22．重組人肥大細胞食糜酶的制備根據Urada等(Journal Biological Chemistry 266:17173,1991)中所報道的方法制備重組pro-型人肥大細胞食糜酶。從而，通過肝素瓊脂糖凝膠(Pharmacia)純化用含有編碼人肥大細胞食糜酶的cDNA的重組桿狀病毒感染的昆蟲細胞(Tn5)的培養上清液。通過Murakami等(Journal Biological Chemistry 270:2218,1995)中報道的方法進一步用肝素瓊脂糖凝膠純化后，得到的活化的人肥大細胞食糜酶。實施例23．抑制重組人肥大細胞食糜酶活性的測定將含有本發明化合物的DMSO溶液(2μl)加入到含有1-5ng在工作實施例22中得到的活化人肥大細胞食糜酶的50μl緩沖液A(0.5-3.0MNaCl,50mM Tris-HCl,pH8.0)中，向其中加入含有作為底物的0.5mM琥珀酰-丙氨酰-組氨酰-脯氨酰-苯丙氨酰對硝基苯胺(Bacchem)，使混合物在室溫下反應5分鐘。測量在405nm處吸光度隨時間的變化，以評定抑制活性。
結果，在第63、64、65、143、174、256、264、272、311、354、319、349、358、395、401和402號化合物中觀察到IC50=不小于1nM和低于10nM，在第37、50、84、115、117、119、121、123、130、147、168、256、320、321、324、352、355、364、380、392、398、444、455、459、460、506、863、866和869號化合物中觀察到IC50=不小于10nM和不大于100nM。
如上文所述，本發明的苯并咪唑衍生物顯示出有效的食糜酶抑制活性。因此揭示出本發明的苯并咪唑衍生物是可臨床應用的、人類食糜酶活性的抑制劑，并可用于預防和/或治療許多涉及人類食糜酶的疾病。
權利要求
1．由以下式(1)代表的硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽 其中R1和R2，同時或彼此獨立代表氫原子、鹵原子、三鹵甲基、氰基、羥基、有1-4個碳原子的烷基或有1-4個碳原子的烷氧基或R1和R2一起形成-O-CH2-O-、-O-CH2-CH2-O-或-CH2-CH2-CH2-，其中碳原子可由一個或多個具有1-4個碳原子的烷基取代；A代表單鍵、取代或未取代的、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈亞烷基，取代或未取代的、有6-11個碳原子的亞芳基，或取代或未取代的、有4-10個碳原子的亞雜芳基(在環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)，其中取代基代表鹵原子、OH、NO2、CN、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基(該取代基可在相鄰位置通過一個縮醛鍵互相連接)、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷硫基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基磺酰基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈酰基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈酰氨基、三鹵甲基、三鹵甲氧基、苯基、氧代基團或可由一個或多個鹵原子取代的苯氧基，其中所述取代基可在所述環或亞烷基的任何一個或多個位置上被獨立取代；E代表COOR3、SO3R3、CONHR3、SO2NHR3、四唑基、5-氧代-1,2,4-噁二唑基或5-氧代-1,2,4-噻二唑基，其中R3代表氫原子或有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基；G代表取代或未取代的、直鏈或支鏈的、可被一個或多個O、S、SO2和NR3間斷的有1-6個碳原子的亞烷基，其中R3如上所定義，該取代基代表鹵原子、OH、NO2、CN、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈的烷基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基(該取代基可在相鄰位置通過縮醛鍵互相連接)、三鹵甲基、三鹵甲氧基、苯基或氧代基團；m代表0-2的整數；當m是0和A是取代或未取代的、直鏈或支鏈的、有1-6個碳原子的亞烷基時，則J代表取代或未取代的、有1-6個碳原子的直鏈、環狀或支鏈烷基，有7-9個碳原子的取代或未取代芳基，有10-11個碳原子的取代的芳基，取代或未取代的、有4-10個碳原子的雜芳基(在環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)；當m是0和A是取代或未取代的有6-11個碳原子的亞芳基或者取代或未取代的有4-10個碳原子的亞雜芳基(在環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)時，則J代表取代或未取代的、有1-6個碳原子的直鏈、環狀或支鏈烷基，有6-11個碳原子的取代或未取代芳基或有4-10個碳原子的取代或未取代的雜芳基(在環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)；或當m是0和A是單鍵或者當m是1或2時，則J代表取代或未取代的、有1-6個碳原子的直鏈、環狀或支鏈烷基，有6-11個碳原子的取代或未取代芳基，或有4-10個碳原子的取代或未取代雜芳基(在環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子)，其中所述取代基代表鹵原子、OH、NO2、CN、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈的烷基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈的烷氧基(該取代基可在相鄰位置通過縮醛鍵互相連接)、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷硫基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈烷基磺酰基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈酰基、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈酰氨基、取代或未取代的N-酰苯胺基、三鹵甲基、三鹵甲氧基、苯基、氧代基、COOR3基團或可由一個或多個鹵原子取代的苯氧基，其中該取代基在所述環或亞烷基的一個或多個位置上獨立被取代；和X代表CH或氮原子。
2．根據權利要求1的硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽，其特征在于在上式(1)中，A是取代或未取代、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈亞烷基，有6-11個碳原子的取代或未取代亞芳基或者取代或未取代的有4-10個碳原子的亞雜芳基，在環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子。
3．根據權利要求1或2的硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽，其特征在于在上式(1)中，A是有4-10個碳原子的取代或未取代亞雜芳基，在環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子。
4．根據權利要求1、2和3中任一項的硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽，其特征在于在上式(1)中，m是1。
5．根據權利要求1、2和3中任一項的硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽，其特征在于在上式(1)中，m是2。
6．根據權利要求1、2和3中任一項的硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽，其特征在于在上式(1)中，m是0,A是取代或未取代的、有1-6個碳原子的直鏈或支鏈亞烷基，J是有7-9個碳原子的取代或未取代芳基，有10-11個碳原子的取代的芳基，或取代或未取代的、有4-10個碳原子的雜芳基，在環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子。
7．根據權利要求1、2和3中任一項的硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽，其特征在于在上式(1)中，m是0,A是有6-11個碳原子的取代或未取代亞芳基或者有4-10個碳原子的取代或未取代亞雜芳基，在該環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子，J是有6-11個碳原子的取代或未取代芳基或者有4-10個碳原子的取代或未取代雜芳基，在該環上可含有一個或多個氧、氮和硫原子。
8．根據權利要求1-7中任一項的硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽，其特征在于在上式(1)中，G是-CH2-、-CH2-CH2-、-CH2CO-、-CH2CH2O、-CH2CONH-、-CO-、-SO2-、-CH2SO2-、-CH2S-或-CH2CH2S-。
9．根據權利要求1-8中任一項的硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽，其特征在于在上式(1)中，R1和R2同時代表氫原子、鹵原子、有1-4個碳原子的烷基或有1-4個碳原子的烷氧基，或R1和R2各獨立代表氫原子、鹵原子、有1-4個碳原子的烷基、有1-4個碳原子的烷氧基、三鹵甲基、氰基或羥基。
10．根據權利要求1-9中任一項的硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽，其特征在于在上式(1)中，E代表COOH或四唑基。
11．根據權利要求1-10中任一項的硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽，其特征在于在上式(1)中，X代表CH。
12．根據權利要求1-11中任一項的硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽，其特征在于具有抑制人類食糜酶的活性。
13．藥用組合物，其包含至少一種根據權利要求1-12中任一項的硫代苯并咪唑衍生物或其醫學上可接受的鹽和藥學上可接受的載體。
14．根據權利要求13的藥用組合物，其為疾病的預防和/或治療劑。
15．根據權利要求14的預防和/或治療劑，其中所述疾病是炎性疾病、變應性疾病、呼吸器官疾病、循環器官疾病或骨/軟骨代謝疾病。
全文摘要
由通式(1)代表的硫代苯并咪唑衍生物或其藥學上可接受的鹽，其具有有效的人類食糜酶抑制活性，因此，臨床上用作預防和/或治療各種與人類食糜酶有關的疾病。
文檔編號A61K31/415GK1316998SQ9981081
公開日2001年10月10日 申請日期1999年7月14日 優先權日1998年7月15日
發明者松本由之, 竹內進, 長谷直樹 申請人:帝人株式會社