專利名稱：用復合酶酶解牡蠣制備具有胰蛋白酶抑制活性的肽的方法
技術領域：
本發明涉及一種用復合酶分步定向酶解牡蠣制取具有胰蛋白酶抑制活性的肽的方法。
背景技術：
蛋白酶抑制劑是一類具有腫瘤抑制活性的物質，目前牛肺胰蛋白酶抑制劑和人尿胰蛋白酶抑制劑已經被開發成腫瘤的輔助藥物，廣泛應用于臨床。國外已有人以太平洋褶柔魚、鰹魚、河豚魚、對蝦、白姑魚、長蛇鯔魚等水產品為原料，分別從其肝臟、卵、表皮粘液和肌肉中分離到了蛋白酶抑制劑，所得產品主要應用于疾病的預防和治療。但是，迄今尚未見從蛋白水解物中提取蛋白酶抑制劑的報道。目前存在的問題主要是天然胰蛋白酶抑制劑的含量非常有限，而且提取比較困難。

發明內容
本發明的目的是提供一種用復合酶定向酶解牡蠣制取具有胰蛋白酶抑制活性的肽的方法，它能彌補現有技術的上述不足。
一種用復合酶分步定向酶解牡蠣制取具有胰蛋白酶抑制活性的肽的方法，其特征是將牡蠣肉加入2～4倍肉重的Tris-HCl緩沖液打漿，按照550～650U/g肉的比例加入風味堿性蛋白酶，恒溫攪拌，在45～55℃下酶解1～2小時，然后滅酶，冷卻；用鹽酸調pH至5-6，按照650-750U/g肉的比例加入菠蘿蛋白酶，攪拌，45-55℃下恒溫酶解1-2小時，滅酶，冷卻，離心，取上清液經過10k超濾膜和Sephadex G-25柱層析分離純化后，凍干。
本發明以低值的牡蠣為原料，利用風味堿性蛋白酶和菠蘿蛋白酶復合酶解制備具有胰蛋白酶抑制活性的肽，所得產物活性高，對商品胰蛋白酶活性的抑制率可達67％。
具體實施例方式將牡蠣肉加入2～4倍，最好是3倍肉重的Tris-HCl緩沖液(0.05M、pH8.5)中打漿，體系最初pH為8～9，最好是8.5。按照550～650U/g肉，最好是600U/g肉的比例加入風味堿性蛋白酶(Alcalase)，在45～55℃，最好是50℃下恒溫攪拌，酶解1～2小時，最好是1小時，然后100℃滅酶，冷卻至40-50℃，最好45℃；用鹽酸調pH至5-6，最好是5.5，按照650-750U/g肉，最好是700U/g肉的比例加入菠蘿蛋白酶，攪拌，在45-55℃，最好是50℃下恒溫酶解1-3小時，最好是2小時，然后100℃滅酶，冷卻至常溫，4000r/min以上的轉速下離心，取上清液經過10k超濾膜和Sephadex G-25柱層析分離純化后，凍干即得到具有胰蛋白酶抑制活性的肽(分子量≤10k)。
權利要求
一種用復合酶分步定向酶解牡蠣制取具有胰蛋白酶抑制活性的肽的方法，其特征是將牡蠣肉加入2～4倍肉重的Tris-HCl緩沖液打漿，按照550～650U/g肉的比例加入風味堿性蛋白酶，恒溫攪拌，在45～55℃下酶解1～2小時，然后滅酶，冷卻；用鹽酸調pH至5-6，按照650-750U/g肉的比例加入菠蘿蛋白酶，攪拌，45-55℃下恒溫酶解1-2小時，滅酶，冷卻，離心，取上清液經過10k超濾膜和Sephadex G-25柱層析分離純化后，凍干。
全文摘要
一種用復合酶分步定向酶解牡蠣制取具有胰蛋白酶抑制活性的肽的方法，其特征是將牡蠣肉加入2～4倍肉重的Tris－HCl緩沖液(0.05M、pH8.5)打漿，按照550～650U/g肉的比例加入風味堿性蛋白酶，恒溫攪拌，在45～55℃下酶解1～2小時，然后滅酶，冷卻；用鹽酸調pH至5－6，按照650－750U/g肉的比例加入菠蘿蛋白酶，攪拌，45－55℃下恒溫酶解1－2小時，滅酶，冷卻，離心，取上清液經過10k超濾膜和Sephadex G－25柱層析分離純化后，凍干。本發明以低值的牡蠣為原料，利用風味堿性蛋白酶和菠蘿蛋白酶復合酶解制備具有胰蛋白酶抑制活性的肽，所得產物活性高，對商品胰蛋白酶活性的抑制率可達67％。
文檔編號A61P35/00GK1724683SQ20051004415
公開日2006年1月25日 申請日期2005年7月15日 優先權日2005年7月15日
發明者曾名湧, 崔海英, 劉尊英, 董士遠 申請人:中國海洋大學