一種治療黑色素瘤的中藥組合物及其制備方法
【專利摘要】本發明屬于中藥領域，涉及一種治療黑色素瘤的中藥組合物及其制備方法。為了克服現有技術中化學治療過程對黑色素瘤患者的副作用較大，本發明提供一種能夠治療黑色素瘤的中藥組合物，其主要由刺五加、黨參、山楂、地榆等多味中藥制備得到。其用于黑色素瘤治療時可以顯著抑制黑色素瘤細胞增殖和誘導細胞凋亡,且藥物的副作用低，適合開發成黑色素瘤治療藥物。
【專利說明】一種治療黑色素瘤的中藥組合物及其制備方法

【技術領域】
[0001] 本發明屬于中藥【技術領域】，特別是涉及一種用于治療黑色素瘤的中藥組合物及其 制備方法。

【背景技術】
[0002] 惡性黑素瘤是由皮膚和其他器官黑素細胞產生的腫瘤。皮膚黑素瘤表現為色素 性皮損在數月或數年中發生明顯改變。雖其發病率低，但其惡性度高，轉移發生早，死亡率 高，因此早期診斷、早期治療很重要。惡性黑素瘤大多發生于成人，巨大性先天性色素痣繼 發癌變的病例多見于兒童。黑素瘤病因學尚未完全闡明。一些研宄資料提示，其發生與下 列危險因素有關：基因、環境及基因/環境共同因素。比如不典型（發育不良）痣或黑色素 瘤家族史、光導致色素沉著的皮膚、不容易曬黑皮膚、紅色頭發人種、強的間斷日光暴露、日 曬傷、多發黑色素細胞痣等。基因/環境多種因素導致黑素瘤惡性轉化。惡性轉化的關鍵 細胞通路：Rb通路、p53通路、PI3K/AKT通路、RAS/MAPK通路（20?30% NRAS突變，55? 60% BRAF 突變）。
[0003] 皮膚惡性黑素瘤的臨床癥狀，包括出血、瘙癢、壓痛、潰瘍等，一般來講，黑素瘤的 癥狀與發病年齡相關，年輕患者一般表現為瘙癢、皮損的顏色變化和界限擴大，老年患者一 般表現為皮損出現潰瘍，通常提示預后不良。皮膚惡性黑素瘤的皮損表現與解剖部位及腫 瘤的生長方式相關，即與組織學類型相關，組織學類型又因年齡、型別、種族的不同而有很 大差異。不同類型的黑素瘤具有不同的病因和遺傳學背景，目前黑素瘤的臨床組織學分型 采用Clark分型，包括四型：惡性雀斑痣樣黑素瘤（LMM);淺表擴散性黑素瘤；肢端雀斑樣 黑素瘤/黏膜黑素瘤；結節性黑素瘤（NM)。在患惡性黑素瘤的白種人中，約70%為SSM。但 在所有惡性黑素瘤的亞洲人中，發生于較少日光照射部位的ALM占72%。
[0004] 目前臨床對于黑色素瘤的治療原則為對早期未轉移的損害應手術切除，應根據 Breslow深度確定切除皮損周邊正常皮膚的范圍，如果是指（趾）惡性黑素瘤，可采用截指 (趾）術。應切除受累淋巴結，但預防性淋巴結切除仍有爭議。肢體動脈灌注抗有絲分裂藥 物治療肢體黑素瘤有一定療效。雖然生物化學治療和分子靶向治療具有很大的前景，但對 于發生廣泛轉移的黑色素瘤患者采用聯合化療和放射治療仍是最主要的治療方式。本發明 旨在提供一種療效確切并且毒副作用低的黑色素瘤治療藥物。


【發明內容】

[0005] 現有技術中化學治療過程對黑色素瘤患者的副作用較大，并且對于黑色素瘤細胞 的殺滅不能令人滿意。為了克服上述現有技術的不足，本發明的目的是提供一種能夠治療 黑色素瘤的中藥組合物，其可以顯著殺滅黑色素瘤細胞，適合開發成黑色素瘤治療藥物。
[0006] -種治療黑色素瘤的中藥組合物，其由以下重量份配比的原料制成：刺五加8-20 份、黨參5-15份、山楂5-15份、地榆3-10份、仙鶴草10-25份、淫羊藿5-15份、黃連10-20 份、漢黃芩3-10份、木通10-20份、黃柏8-20份、制何首烏5-12份、枸杞10-20份、知母3-10 份、姜黃5-15份、芡實3-10份、石斛3-10份、牛膝5-12份、五倍子10-15份、當歸10-20份、 厚樸3-10份、黃芪5-15份、金銀花5-15份、天麻5-25份、茯苓10-20份；
[0007] 本發明上述中藥均為臨床常用中藥，其入藥部位均為本領域技術人員所熟知，所 述的中藥組合物經過合理配伍后能夠顯著減輕黑色素瘤治療過程中的毒副作用，并增強療 效。根據中藥組合物對黑色素瘤藥物或放射治療過程中的黑色素瘤細胞殺滅的增強效果 以及對于治療過程中毒副作用的減輕效果的差異，發明人在上述中藥組合物基礎上優選如 下：
[0008] (一）刺五加15份、黨參10份、山楂10份、地榆7份、仙鶴草18份、淫羊藿10份、 黃連15份、漢黃芩7份、木通15份、黃柏14份、制何首烏9份、枸杞15份、知母7份、姜黃 10份、芡實7份、石斛6份、牛膝8份、五倍子13份、當歸15份、厚樸7份、黃芪10份、金銀 花10份、天麻20份、茯苓15份。
[0009] (二）刺五加8份、黨參5份、山楂5份、地榆3份、仙鶴草10份、淫羊藿5份、黃連 10份、漢黃芩3份、木通10份、黃柏8份、制何首烏5份、枸杞10份、知母3份、姜黃5份、芡 實3份、石斛3份、牛膝5份、五倍子10份、當歸10份、厚樸3份、黃芪5份、金銀花5份、天 麻5份、茯苓10份。
[0010] (三）刺五加20份、黨參15份、山楂15份、地榆10份、仙鶴草25份、淫羊藿15份、 黃連20份、漢黃芩10份、木通20份、黃柏20份、制何首烏12份、枸杞20份、知母10份、姜 黃15份、芡實10份、石斛10份、牛膝12份、五倍子15份、當歸20份、厚樸10份、黃芪15 份、金銀花15份、天麻25份、茯苓20份。
[0011] (四）刺五加12份、黨參12份、山楂10份、地榆5份、仙鶴草16份、淫羊藿18份、 黃連13份、漢黃芩6份、木通20份、黃柏10份、制何首烏8份、枸杞16份、知母6份、姜黃 10份、芡實5份、石斛8份、牛膝7份、五倍子8份、當歸14份、厚樸10份、黃芪5份、金銀花 15份、天麻15份、茯苓17份。
[0012] 本發明的中藥組合物可以制備成臨床上常用的劑型。優選地，本發明中藥組合物 按照常規制備工藝制備成散劑、合劑、片劑或膠囊劑。本發明還提供一種上述中藥組合物的 制備方法，其包括下述步驟：取處方量中藥材碎成粗粉，按照粗粉總重量的4?9倍加入體 積濃度為40%?95%的乙醇溶液，回流提取三次，回流時間為2?5h，濾過，濾液合并后回 收乙醇，冷卻過濾，用水洗滌，干燥后即得中藥浸膏；本領域技術人員可在該制備方法技術 上制備得到臨床上常用中藥藥物劑型，如片劑、膠囊劑等。
[0013] 本發明還請求保護上述中藥組合物在制備治療黑色素瘤的藥物中的用途。本發明 中藥組合物具有顯著抑制黑色素瘤細胞增殖以及誘導細胞凋亡的作用，本發明實施例7顯 示，本發明中藥組合物體外對三種黑色素瘤細胞株（B16、A375和SK-MEL-2)細胞增殖均顯 示了較強的抑制作用，以25-100mg/mL濃度最為顯著。采用AnnexinV和PI雙染流式細胞術 檢測表明，本發明中藥組合物對人黑色素瘤細胞株A375顯示了較強的誘導細胞凋亡作用， 適宜開發成黑色素瘤治療藥物。
[0014] 本發明中藥組合物在治療黑色素瘤方面，與現有技術相比具有如下優勢：
[0015] 1)與當前黑色素瘤治療藥物相比，本發明中藥組合物為天然純中藥制劑，不良反 應和副作用顯著降低，且本發明中藥組合物作用全面，藥物治療效果更佳，顯著提高了黑色 素瘤患者的用藥依從性，并提高了患者的生活質量。
[0016] 2)本發明中藥組合物中含有多種藥物組分，作用靶點眾多，藥理實驗顯示其具有 顯著降低化學藥物治療過程中毒副作用的效果，提高其對黑色素瘤細胞的黑色素瘤抑制效 果。

【具體實施方式】
[0017] 以下通過具體實施例進一步描述本發明，但本領域技術人員應該知曉，所述實施 例并不以任何方式限制本發明。
[0018] (一）制劑實施例部分
[0019] 實施例1本發明中藥組合物及制備工藝
[0020] 處方組成如下：刺五加 80g、黨參50g、山楂50g、地榆30g、仙鶴草100g、淫羊藿 50g、黃連100g、漢黃芩30g、木通100g、黃柏80g、制何首烏50g、枸杞100g、知母30g、姜黃 5〇g、芡實30g、石斛30g、牛膝50g、五倍子100g、當歸100g、厚樸30g、黃芪50g、金銀花50g、 天麻50g、茯苳IOOg ;
[0021] 制備方法：取處方量中藥材碎成粗粉，按照粗粉總重量的4倍加入體積濃度為 40%的乙醇溶液，回流提取三次，回流時間為5h，濾過，濾液合并后回收乙醇，冷卻過濾，用 水洗滌，干燥后即得中藥浸膏；將中藥浸膏粉碎并加入制劑常用輔料制備成片劑或膠囊劑。
[0022] 實施例2本發明中藥組合物及制備工藝
[0023] 處方組成如下：刺五加 200g、黨參150g、山楂150g、地榆100g、仙鶴草250g、淫 羊藿150g、黃連200g、漢黃芩100g、木通200g、黃柏200g、制何首烏120g、枸杞200g、知母 l〇〇g、姜黃150g、芡實100g、石斛100g、牛膝120g、五倍子150g、當歸200g、厚樸100g、黃芪 150g、金銀花150g、天麻250g、茯苓200g ;
[0024] 制備方法：取處方量中藥材碎成粗粉，按照粗粉總重量的5倍加入體積濃度為 90%的乙醇溶液，回流提取三次，回流時間為3h，濾過，濾液合并后回收乙醇，冷卻過濾，用 水洗滌，干燥后即得中藥浸膏；將中藥浸膏粉碎并加入制劑常用輔料制備成片劑或膠囊劑。
[0025] 實施例3本發明中藥組合物及制備工藝
[0026] 處方組成如下：刺五加 150g、黨參100g、山楂100g、地榆70g、仙鶴草180g、淫羊藿 l〇〇g、黃連150g、漢黃芩70g、木通150g、黃柏140g、制何首烏90g、枸杞150g、知母70g、姜 黃l〇〇g、芡實70g、石斛60g、牛膝80g、五倍子130g、當歸150g、厚樸70g、黃芪100g、金銀花 100g、天麻 200g、茯苳 150g ;
[0027] 制備方法：取處方量中藥材碎成粗粉，按照粗粉總重量的5倍加入體積濃度為 70%的乙醇溶液，回流提取三次，回流時間為4h，濾過，濾液合并后回收乙醇，冷卻過濾，用 水洗滌，干燥后即得中藥浸膏；將中藥浸膏粉碎并加入制劑常用輔料制備成片劑或膠囊劑。
[0028] 實施例4本發明中藥組合物及制備工藝
[0029] 處方組成如下：刺五加 80g、黨參150g、山楂150g、地榆30g、仙鶴草250g、淫羊藿 150g、黃連100g、漢黃苳100g、木通100g、黃柏160g、制何首烏120g、枸杞100g、知母30g、姜 黃50g、芡實100g、石斛100g、牛膝70g、五倍子100g、當歸150g、厚樸30g、黃芪100g、金銀 花100g、天麻100g、茯苳IOOg ;
[0030] 制備方法：取處方量中藥材碎成粗粉，按照粗粉總重量的5倍加入體積濃度為 70%的乙醇溶液，回流提取三次，回流時間為4h，濾過，濾液合并后回收乙醇，冷卻過濾，用 水洗滌，干燥后即得中藥浸膏；加入乙醇至含醇量為75% (v/v)，靜置24小時，取上清液，回 收乙醇濃縮，加水至1000ml，攪勻，分裝，流通蒸汽滅菌35min，即得合劑。
[0031] 實施例5本發明中藥組合物及制備工藝
[0032] 處方組成如下：刺五加120g、黨參120g、山楂100g、地榆50g、仙鶴草160g、淫羊藿 180g、黃連130g、漢黃苳60g、木通200g、黃柏100g、制何首烏80g、枸杞160g、知母60g、姜 黃l〇〇g、芡實50g、石斛80g、牛膝70g、五倍子80g、當歸140g、厚樸100g、黃芪50g、金銀花 150g、天麻 150g、茯苳 170g ;
[0033] 制備方法同實施例4。
[0034] 實施例6本發明中藥組合物及制備工藝
[0035] 處方組成如下：刺五加140g、黨參100g、山楂130g、地榆60g、仙鶴草200g、淫羊藿 150g、黃連200g、漢黃苳30g、木通160g、黃柏110g、制何首烏70g、枸杞160g、知母70g、姜 黃110g、芡實50g、石斛100g、牛膝120g、五倍子150g、當歸160g、厚樸100g、黃芪150g、金 銀花120g、天麻180g、茯苓170g ;
[0036] 制備工藝同實施例4。
[0037] (二）藥效實施例部分
[0038] 實施例7 :本發明中藥組合物對黑色素瘤細胞株的抑制作用
[0039] 1、細胞株：小鼠黑色素瘤細胞株（B16)，購自中國科學院上海細胞庫。人黑色素瘤 細胞株仏375和51(-1^1^-2)購自4了〇：。上述細胞株用含有10%胎牛血清的01^1培養基在 37°C、體積分數為5 % C02、完全飽和濕度條件下常規培養，48h更換培養基，細胞生長達飽 合狀態時，用0. 25%胰蛋白酶+0. 02% EDTA消化傳代，2?3d傳代1次，實驗選用對數生長 期細胞。
[0040] 2、細胞增殖的檢測：
[0041] 分別調整B16、A375和SK-MEL-2細胞株細胞懸液濃度為I X 105/mL，加入96孔培 養板內，每孔100μL，置37°C5%C02孵箱培養24h。吸除舊培養基，分別加入含本發明中 藥組合物的無血清DMEM培養基（藥物濃度為100mg/mL，50mg/mL，25mg/mL，5mg/mL)，并設 空白對照組和調零組，每組均設3復孔，繼續培養24h。加入10 μ LWST-8溶液，培養2h。在 490nm處檢測各孔的吸光值。細胞增殖抑制率=〔1-(加藥組OD平均值-調零孔OD平均 值V (空白對照組OD平均值-調零孔OD平均值）〕X 100%。實驗重復3遍以上。
[0042] 3、細胞凋亡的檢測
[0043] 調整A375細胞懸液濃度為I X 106/mL，將細胞接種于6孔板，每孔1ml。待細胞 生長達融合狀態后，吸棄原培養基，分別加入含本發明中藥組合物（藥物濃度為100mg/mL， 50mg/mL，25mg/mL，5mg/mL)的無血清DMEM培養基，空白組加含0. 1 % DMSO的培養基，藥物 作用24h后，將細胞上清吸至離心管內，細胞經胰酶消化后，移至與細胞上清相同的離心管 內，1000rpm4°C離心5min，棄上清，用PBS洗1遍，棄上清，用Binding buffer洗1遍，并 以195 μ L Binding buffer重懸，5 μ L Annexin V-FITC混勻后室溫避光孵育10分鐘，用 Binding buffer洗1遍，并以190 μ L Binding buffer重懸，加10 μ LPI混勾后流式細胞儀 上機檢測。
[0044] 4實驗結果
[0045] 4. 1本發明中藥組合物對三種黑色素瘤細胞株細胞增殖影響的檢測結果
[0046] 表1本發明中藥組合物對三種黑色素瘤細胞株細胞增殖影響的檢測結果
[0047]

【權利要求】
1. 一種治療黑色素瘤的中藥組合物，其特征在于，所述的中藥組合物主要由以下重量 份的原料制得：刺五加8-20份、黨參5-15份、山楂5-15份、地榆3-10份、仙鶴草10-25份、 淫羊藿5-15份、黃連10-20份、漢黃芩3-10份、木通10-20份、黃柏8-20份、制何首烏5-12 份、枸杞10-20份、知母3-10份、姜黃5-15份、芡實3-10份、石斛3-10份、牛膝5-12份、五 倍子10-15份、當歸10-20份、厚樸3-10份、黃芪5-15份、金銀花5-15份、天麻5-25份、茯 苓10-20份。
2. 如權利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，所述的中藥組合物主要由以下重量 份的原料制得：刺五加15份、黨參10份、山楂10份、地榆7份、仙鶴草18份、淫羊藿10份、 黃連15份、漢黃芩7份、木通15份、黃柏14份、制何首烏9份、枸杞15份、知母7份、姜黃 10份、芡實7份、石斛6份、牛膝8份、五倍子13份、當歸15份、厚樸7份、黃芪10份、金銀 花10份、天麻20份、茯苓15份。
3. 如權利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，所述的中藥組合物主要由以下重量 份的原料制得：刺五加8份、黨參5份、山楂5份、地榆3份、仙鶴草10份、淫羊藿5份、黃連 10份、漢黃芩3份、木通10份、黃柏8份、制何首烏5份、枸杞10份、知母3份、姜黃5份、芡 實3份、石斛3份、牛膝5份、五倍子10份、當歸10份、厚樸3份、黃芪5份、金銀花5份、天 麻5份、茯苓10份。
4. 如權利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，所述的中藥組合物主要由以下重量 份的原料制得：刺五加20份、黨參15份、山楂15份、地榆10份、仙鶴草25份、淫羊藿15份、 黃連20份、漢黃芩10份、木通20份、黃柏20份、制何首烏12份、枸杞20份、知母10份、姜 黃15份、芡實10份、石斛10份、牛膝12份、五倍子15份、當歸20份、厚樸10份、黃芪15 份、金銀花15份、天麻25份、茯苓20份。
5. 如權利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，所述的中藥組合物主要由以下重量 份的原料制得：刺五加12份、黨參12份、山楂10份、地榆5份、仙鶴草16份、淫羊藿18份、 黃連13份、漢黃芩6份、木通20份、黃柏10份、制何首烏8份、枸杞16份、知母6份、姜黃 10份、芡實5份、石斛8份、牛膝7份、五倍子8份、當歸14份、厚樸10份、黃芪5份、金銀花 15份、天麻15份、茯苓17份。
6. 如權利要求1-5任一所述的中藥組合物，其特征在于，所述的中藥組合物為散劑、合 劑、片劑或膠囊劑。
7. -種制備權利要求1-5任一所述中藥組合物的方法，其特征在于，所述制備方法 包括如下步驟：取處方量中藥材碎成粗粉，按照粗粉總重量的4?9倍加入體積濃度為 40%?95%的乙醇溶液，回流提取三次，回流時間為2?5h，濾過，濾液合并后回收乙醇，冷 卻過濾，用水洗滌，干燥后即得中藥浸膏；本領域技術人員可在該制備方法技術上制備得到 臨床上常用中藥藥物劑型。
8. 權利要求1-5任一所述的中藥組合物在制備治療黑色素瘤的藥物中的用途。
【文檔編號】A61P35/00GK104491766SQ201510042242
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2015年1月27日 優先權日:2015年1月27日
【發明者】胡學榮 申請人:鄒士東