專利名稱：治療劑及其用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及用于治療有AIDS(獲得性免疫缺陷綜合癥)或沒有AIDS的HIV感染的治療劑。
人們知道，AIDS是由逆轉錄病毒科的一種病毒引起的，該病毒稱為HIV(人類免疫缺陷病毒)。然而，感染上HIV并不立即出現明顯的AIDS癥狀。使病毒暴露的唯一指征是，在受感染者的血液中可以存在抗體，繼而稱該受感染者“HIV陽性”。感染階段可以處于休眠狀態，不出現任何明顯的癥狀。AIDS發育期前的潛伏期可以是從數月到數十年不等。AIDS發育期之前可以是AIDS相關綜合征(ARC)，AIDS相關綜合征的特征為無緣由的發燒，體重減輕，慢性咳嗽或腹瀉。
對于在感染上病毒和感染個體的免疫系統崩潰之間的可變更期限的原因了解甚少。目前未知的因素可能導致病毒的繁殖，從而破壞免疫系統。于是該病人會患有各種感染并且由于免疫系統失去作用而惡化導致死亡。
HIV感染與結核病間的聯系眾所周知。HIV感染的早期結果是使以前休眠的結核桿菌復能。維持對分支桿菌的抵抗力是個主動的免疫過程，該過程由于HIV感染而遭到破壞。在雙重感染的病人中休眠結核桿菌的復能速度快且該復能通常發生在出現其它的HIV/AIDS相關感染之前，這強烈地暗示HIV感染的重要結果正是破壞了可能是T-細胞傳遞的維持分支桿菌休眠的免疫功能。
也有證據表明，HIV感染加上活動性結核病時，CD4T細胞明顯減少，從而使AIDS的明顯癥狀非常迅速地發展。事實上似乎是，在結核病中釋放的免疫遞質加速了HIV前病毒的復能轉化(transactivation)。
我們曾敘述了衍生自分支桿菌屬Mycobacteriumvaccae'用于治療結核病的抗原和/或免疫調節物質的用途(見，例如英國專利第2156673號和美國專利第4724144號)。在我們的國際專利申請第PCT/GB90/01169號(公開號為WO91/01751)中描述了同種物質用在免疫預防治療AIDS，即延長在感染HIV和AIDS的發育之間這一時期方面的用途。
現在我們發現該相同的治療劑不僅能推遲HIV感染病的AIDS發育，而且能夠減輕或甚至消除即使是病情嚴重的患者的AIDS的明顯癥狀。在也患有結核病的患者身上發現了這些結果，而在有或沒有AIDS以沒與結核病無關的HIV感染的病人身上也預期能得到這些結果。
因此，本發明提供抗原和/或免疫調節物質的用途，該物質為衍生自Mycobacteriumvaccae用于生產可用于治療與結核病相關或無關的AIDS以及也治療與結核病相關或無關的HIV陽性無癥狀的病人的藥物。該物質可給例如HIV陽性以及表現出也有或沒有結核病的明顯癥狀的AIDS的患者使用，給藥量按足以至少能阻止癥狀發展的劑量。
因此，本發明治療劑含有M.vaccae的死細胞比較好，含有經高壓滅菌法殺死的細胞最好。免疫治療劑為通常每毫升稀釋劑中含微生物108以上，最好是每毫升稀釋劑中含殺死的M.vaccae微生物108-1011。本發明包括得自M.vaccae用于治療有或沒有AIDS和HIV感染和與結核病相關或無關的HIV感染的抗原和/或免疫調節物質。
稀釋劑可以是注射用無熱原鹽水，或是PH9.0的硼酸鹽緩沖液。稀釋劑應該滅菌。適宜的硼酸鹽緩沖液為Na2B4O7.10H2O 3.63gH3BO35.25gNaCl6.19g
Tween0.0005%蒸餾水至1升優選的M.vaccae菌株是從烏干達中部Lango地區的泥漿樣品中分離出來并用R877R表示的菌株(J.L.Stanford和R.C.Paul，Ann.Soc.BelgeMed，Trop.1973，53，第141-389頁)。該菌株是穩定的粗略變種并屬于aurum亞種。可用生化和抗原的判斷的標準鑒定其屬于M.vaccae(R.Bonicke，S.E.Juhasz，Zentralbl.Bakteriol.Parasitenkd.InfectionSkr.Hyg.Abt.1，Orig.，1964，192，第133頁)。
由R877R表示的菌株被保存在NationalCollectionofTypeCultures(NCTC)CentralPublicHealthLaboratory，ColindaleAvenue，倫敦NW95HT，存放日期為聯合王國1984年2月13日，編號為NCTC11659號。
就該免疫治療劑的制備而言，微生物M.vaccae可以在適當的固體培養基中生長。優選改良的Sartor氏液體培養基(S.V.Boyden和E.Sorkin.，J.Immunol，1955，75，第15頁)，用瓊脂固化。
固體培養基最好含1.3%瓊脂。將用微生物接種后的培養基有氧培養以使該微生物能夠生長，一般于32℃培養10天。獲得生物體，然后稱重并將其懸浮于稀釋劑中。稀釋劑可以是非緩沖鹽水但最好是硼酸鹽緩沖的并含有如上所述諸如吐溫80的表面活性劑。將懸浮液稀釋，得到100mg微生物/ml的懸浮液。最好用硼酸鹽緩沖鹽水進一步稀釋，以使懸浮液成為含10mg微生物(濕重)/ml稀釋劑的懸浮液。然后分裝于5ml多劑小瓶中。盡管瓶中的微生物可以用輻射例如劑量為2.5兆拉德的鈷60輻射或用其它任何手段例如化學方法殺死，但優選高壓血菌法殺滅微生物，例如在10磅/平方英寸的壓力下滅菌10分鐘(115°-125℃)。現已發現高壓滅菌法能生產出比輻射滅菌法更有效的制劑。
免疫治療通常是真皮內注射給藥，注射體積在0.1-0.2ml范圍內，最好是0.1ml。每個單劑量一般含107-1010殺死的M.vaccae微生物。最好給病人使用含108-109殺死的M.vaccae的單劑，但可以根據病人的情況重復該劑量。
盡管免疫治療劑通常是真皮內注射核藥，但也可以使用其它給藥途徑，例如口服。
本發明包括治療有或沒有AIDS的HIV感染以及有或沒有與結核病有關的AIDS的HIV感染的方法，它包括給有或沒有AIDS的HIV感染以及與結核病有關或無關的HIV感染的患者使用衍生自Mycobacteriumvaccae的抗原和/或免疫調節物質，用量按足以產生對AIDS癥狀有效的免疫反應的劑量。
對于20-50%HIV感染的非洲病人來說，結核病是AIDS發育期的第一個癥狀，在一組接受結核病治療的病中有17人由WellcomeELISA檢查為HIVI血清反應陽性，針對他們的結核病，給所有的病人開了鏈霉素、異煙肼、利福平和吡嗪酰胺。縮短治療時間，在任何情況下治療時間都沒超過3個月，17個病人中，8個接受本發明治療劑，其余9個給予安慰劑(鹽水)。跟蹤調查，約1年后僅有三個只接受了抗結核藥物治療的病人活下來了，但所有三個人的結核病都加重了。8個接受本發明治療劑中的7個人痰涂片檢查變成抗酸桿菌(例如結核桿菌)陰性并且病情的綜合改善情況類似于HIV外部陽性的結核病人。在診斷時，8個病人中的5個出現淋巴結病，但在跟縮調查時都消退了。在跟蹤調查時，其中2個病人再進行血清學檢查時發現HIVl陰性。
使用一種以上M.vaccat菌株和/或包括其它分支桿菌抗原的治療劑是有利的并在本發明范圍內，也可以包括結核菌素。
治療劑也可含卡介面，尤其是該疫苗的冷凍干燥品以增強該治療劑的效果。
治療劑可以含其它成分，例如輔助劑、防腐劑、穩定劑等。可以將治療劑制成滅菌注射液或使用前可配制的滅菌冷凍干燥產品。
可以使用M.vaccae或該有機體的提取物或分出的部分制備本發明治療劑。
下列實施例描述用于本發明的治療劑的制備。
實施例M.vaccee生長在固體培養基上，該培養基為用1.3%瓊脂固化的改良Sauton氏培養基。將微生物接種于該培養基并于32℃培養10天，使微生物能夠生長。然后收集微生物，稱重并將其懸浮于稀釋劑中，得到100mg微生物/ml稀釋劑的懸浮液。然后將該懸浮液進一步用緩沖鹽水稀釋至得到含10mg微生物(濕重)/ml稀釋劑的懸浮液，并將其分裝至5ml多劑小瓶中。然后將含活微生物的小瓶于10磅/平方英寸壓力下高壓滅菌10分鐘以殺死微生物，得到本發明的免疫治療劑，必要時可將其進一步稀釋使用。
該免疫治療劑可按已述方法皮肉注射給藥。
權利要求
1.含有衍生自Mycobacteriumvaccae的抗原和/或免疫調節物質的用于治療有或沒有AIDS以及與結核病有關或無關的HIV感染的免疫治療劑。
2.權利要求1的治療劑，其中源自M.Vaccae的抗原和/或免疫調節物質包括M.vaccae的死細胞。
3.按照權利要求1的治療劑，其中M.vaccae的細胞已為高壓滅菌法殺死。
4.按照權利要求1的治療劑，其中衍生自M.vaccae的物質來自被保存在NationalCollectionofTypeCultures(NCTC)CentralPublicHealthLaboratory，Colindale路，倫敦NW95HT，存放日期為聯合王國1984年2月13日，編號為NCTC11659的菌株。
5.按照上述任一權利要求的治療劑，其中衍生自M.vacea的物質被包含在每劑含有107-1010微生物的藥物中。
全文摘要
本發明涉及用衍生自Mycobacterium vaceae的抗原和/或免疫調節物質的治療有或沒有AIDS以及與結核病有關或無關的HIV感染。
文檔編號A61P31/12GK1089478SQ93117218
公開日1994年7月20日 申請日期1993年9月8日 優先權日1992年9月14日
發明者J·L·施丹福, G·A·W·羅克 申請人:倫敦大學學院