專利名稱：虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于抗腫瘤藥物制備領域，涉及虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的新應用。近三十年來，全球惡性腫瘤發病數以年均3% 5%的速度遞增，世界衛生組織報告 顯示，2020年全世界惡性腫瘤發發病率將比現在增加50%，全球每年新增惡性腫瘤發患者 人數將達到1500萬人，全球因惡性腫瘤發死亡的人數預計將達到700萬人/年，每5秒就 有1人死于癌癥。惡性腫瘤對人類健康和生命的威脅很大，它和心血管疾患已成為醫學上 的兩大難關，在全世界構成死亡原因的頭兩位。對惡性腫瘤的治療，傳統的方法包括手術、 放射治療和化學治療，目前化學治療是晚期惡性腫瘤的主要治療手段之一，雖然近年來分 子靶向藥物層出不窮，但大多數靶向藥物單藥有效率很低，常常需和化療藥物聯合才能取 得較好的療效，一些療效較好的分子靶向藥物在治療失敗后，仍需采用化療等治療手段，因 此，化療在惡性腫瘤治療中仍處于基礎地位，但目前臨床上廣泛使用的化療藥物療效有限， 毒性作用較大，經幾次應用后還會發生耐藥，亟需尋找新的高效低毒的化療藥物。近年來，采用傳統中藥等植物提取物探討惡性腫瘤治療的新途徑引起了人們的關 注，從傳統中藥提取的抗腫瘤藥物如冬凌草甲素、黃連素、姜黃素的體外實驗表明可抑制多 種腫瘤細胞的增殖，動物實驗顯示該類藥物不良反應小，從植物中提取的紫杉醇、喜樹堿、 長春新堿等藥物已在臨床上廣泛應用。因此篩選新型抗腫瘤的植物藥，確定其抗腫瘤作用 并探討其機制，已成為當今腫瘤治療研究領域的熱點之一。虎杖苷是從虎杖的干燥根莖中提取的第4種單體，故又名虎杖結晶4號，也可稱為 白藜蘆醇苷。分子式=C2tlH22O8，分子量390. 131468，化學結構如下所示現代藥理學研究表明虎杖苷對心肌細胞、血管平滑肌細胞、抗血小板聚集、改善微循環 等有顯著作用，此外還能減輕多種因素造成的組織器官損傷，具有保護肝細胞，降血脂及抗 脂質過氧化等作用，例如張霖等人發表的文章探討了虎杖苷對非酒精性脂肪肝大鼠胰島 素抵抗(IR)以及血清腫瘤壞死因子α (TNF-α)的影響，具體方法為健康雄性SD大鼠44 只，隨機分為正常組(A)和模型組(M)，模型組給予高脂飼料喂養8周，造模成功后將模型組 隨機分為5組空白模型組(B)、虎杖苷高劑量組(C_l)、虎杖苷中劑量組(CJ)、虎杖苷低 劑量組(C_3)、非諾貝特組(D)，每組7只，高脂飼料持續8周后，A組、B組予以生理鹽水灌 胃，5 ml/次，C_1、C_2、C_3分別以160、80、40 mg · kg—1 · cf1虎杖苷混懸液灌胃，D組以100 mg · kg"1 · cf1非諾貝特混懸液灌胃.持續4周后處死動物，分離血清，檢測、計算各組大鼠 空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FNS)、胰島素抵抗指數(頂1)、胰島素敏感指數(ISI) ,TNF-a背景技術水平。結果顯示虎杖苷高劑量組與模型組頂1、ISI、TNF-α水平存在顯著差異(Ρ<0. 05， Ρ<0. 01)，且在改善頂方面虎杖苷高劑量組優于西藥對照組(Ρ<0. 01)，可知虎杖苷能改善 NAFLD大鼠體內頂狀態，降低TNF- α水平，是其治療非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的可能 作用機制(參見張霖，呂志平.時珍國醫國藥.2010，21(4))。現有技術書中，未見關于虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的應用的報道。

發明內容
本發明的目的是提供虎杖苷的新應用，即虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的應用。為了實現上述目的，本發明采用的技術方案是虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的應用。本發明同時提供一種抗腫瘤藥物，所述抗腫瘤藥物的主要活性成分為虎杖苷。上述抗腫瘤藥物除了包括主要成分虎杖苷外，需要的時候還可以加入一種或多種 藥學上可接受的載體；所述載體包括藥學領域常規的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤 劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等；所述藥物的劑型包括膠囊、片 劑或注射劑，均可按照藥學領域的常規方法制備。上述技術方案中，所述腫瘤包括乳腺癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、宮頸癌、鼻咽癌、白 血病。
上述抗腫瘤藥物可以以單藥的形式用于治療腫瘤，或者與其他化療藥物以及放射 治療聯合用于惡性腫瘤的綜合治療。由于上述技術方案的應用，本發明相對現有技術具有以下優點1、本發明所述抗腫瘤藥物虎杖苷處理的乳腺癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、宮頸癌、鼻咽癌、 白血病等細胞的增殖均受到明顯的抑制，細胞周期分析則顯示細胞周期S期阻滯和細胞凋 亡；低濃度虎杖苷還具有抑制腫瘤細胞遷移和粘附的作用。2、本發明所述抗腫瘤藥物虎杖苷在增加惡性腫瘤治療效果、降低腫瘤患者復發、 轉移發生率的同時，較目前臨床常用的化療藥物毒副作用明顯減低，從而提高惡性腫瘤患 者的生存期和生活質量。


附圖1為實施例一中指數生長的乳腺癌和肺癌細胞在不同濃度虎杖苷作用下的 生長情況；附圖2為實施例二中虎杖苷對肺癌細胞Α549細胞周期和凋亡的影響。
具體實施例方式下面結合附圖及實施例對本發明作進一步描述 實施例一1. 1材料人乳腺癌細胞株MDA-MB-231及MCF-7，肺癌細胞株ΑΜ9、NCI-H1975,卵巢 癌細胞株SK0V3，肝癌細胞株SMMC-7721，宮頸癌細胞株Hela，白血病細胞株HL-60、K562， 鼻咽癌細胞株CNE-I購于美國細胞收藏中心(ATCC)，實驗室保存和培養；D-MEM、RPMI1640 培養基干粉，小牛血清，胰酶粉末購自Gibco公司；標準蛋白質分子量、SDS-PAGE上樣緩沖液、RIPA蛋白裂解液、TE電泳緩沖液、IOX轉膜液、30%Acry-BiS、TriS-Hcl、過硫酸銨(AP)、 SDS、四甲基乙二胺(TEMED)、碘化丙啶(PI)購自江蘇碧云天生物技術研究所；二甲基亞砜 (DMSO)、瓊脂糖和Tween-20來自上海高科技生物工程有限公司；bcl_2、bax, MMP-2、MMP-9 等抗體購自美國Santa Cruzs生物技術公司。RNase A和10 mg/mL proteinase K購自美 國 Sigma Aldrich 公司。1. 2細胞培養各細胞分別培養于含10%小牛血清，谷氨酸胺及100萬U/L青霉素 和鏈霉素的D-EME或RPMI1640培養基。細胞置于5%C02，37°C培養箱內培養，每2_3天傳 代1次，取對數生長期細胞用于實驗。1. 3 MTT法在藥物處理前M小時細胞(6 X 104/mL)接種至96孔板中，每個濃度 設6個平行孔。加入不同濃度的虎杖苷繼續培養M，48或72小時。細胞培養液中加入20 mLMTT (5 mg/mL)繼續培養4小時。吸棄培養液，每孔加入150 mL DMS0，搖床輕柔振蕩10 分鐘。最后采用酶標儀(A570 nm/A630 nm吸光值)檢測光密度，采用細胞存活率=加藥 組值/對照組值X 100%方式計算細胞存活率。采用上述方法，在指數生長的乳腺癌MDA-MB-231和肺癌A549細胞培養中加入同 濃度的虎杖苷，處理24，48和72小時后完成MTT法測定細胞生長，重復三次不同實驗，將結 果(平均值士誤差)繪制成圖，得圖1，圖1顯示不同濃度的虎杖苷對乳腺癌MDA-MB-231 和肺癌A549細胞的生長抑制率，并顯現劑量-效應和處理時間-效應的關系。采用上述方法，計算虎杖苷對不同腫瘤細胞的50%生長抑制濃度(IC5tl)，將結果繪 制成表，得表1。表1、虎杖苷對不同腫瘤細胞50%生長抑制濃度(IC5tl)
權利要求
1.虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的應用。
2.一種抗腫瘤藥物，其特征在于所述抗腫瘤藥物的主要活性成分為虎杖苷。
全文摘要
本發明屬于抗腫瘤藥物制備領域，涉及虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的新應用。本發明同時提供一種抗腫瘤藥物，所述抗腫瘤藥物的主要活性成分為虎杖苷。本發明所述抗腫瘤藥物虎杖苷處理的乳腺癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、宮頸癌、鼻咽癌、白血病等細胞的增殖均受到明顯的抑制，細胞周期分析則顯示細胞周期S期阻滯和細胞凋亡；低濃度虎杖苷還具有抑制腫瘤細胞遷移和粘附的作用。本發明所述抗腫瘤藥物虎杖苷在增加惡性腫瘤治療效果、降低腫瘤患者復發、轉移發生率的同時，較目前臨床常用的化療藥物毒副作用明顯減低，從而提高惡性腫瘤患者的生存期和生活質量。
文檔編號A61P35/00GK102058609SQ20101061599
公開日2011年5月18日 申請日期2010年12月30日 優先權日2010年12月30日
發明者張玉松, 樊賽軍 申請人:蘇州大學