專利名稱：一種含肌氨肽苷化合物藥物組合物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及醫藥領域，具體涉及一種復方肌氨肽苷藥物組合物，用于輔助治療肝炎引起的肝功能失常等疾病，本發明還涉及該藥物的制備方法。
背景技術：
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肌氨肽苷是由健康家兔肌肉和心肌提取的多種心血管活性物質，其主要成分包括心房肽，降鈣素基因相關肽及三磷酸腺苷(腺苷)等核苷酸(核苷)類，此外還含有二十多種氨基酸及其代謝中間產物。核苷酸酸和多種氨基酸(必需氨基酸)是參與人體生命活動的重要物質。對心血管系統疾病有改善血液循環障礙、降低血管阻力、增加心肌利用氧等作用，能促進造血系統活動增強，白血球數量增多，同時有增加血管彈性、防止血管硬化作用。可用于肌肉萎縮、神經性水腫、腦血管意外性癱瘓、神經性衰弱綜合癥、腦卒中，腦供血不足所致腦功能減退和周圍神經疾病的輔助治療。現有技術多對肌氨肽苷的提取工藝進行了研究，例如專利文獻CN101584713A公開了制備肌氨肽苷的步驟，包括化凍洗凈切塊、勻漿、深凍、加熱煮沸分離上清、酸堿沉淀、堿沉、超濾、再熱壓、深凍、超濾，然后檢測調節多肽與次黃嘌呤的比例，最后經超濾后制成制劑，在其制備過程中使用3KDa的超濾器進行過濾會使降鈣素基因相關肽(CGRP)(含37個氨基酸分子量約為3800D)造成損失。CN1939533B也公開了一種注射用肌氨肽苷粉針劑及其制備方法，其對兔心肌的處理重點在提取其中的次黃嘌呤，而未關注其中的心房肽和降鈣素相關肽。對于肌氨肽苷的劑型目前多采用凍干粉，例如CN1939533B就是公開的一種凍干粉針劑，CN1611261A也公開了一種凍干粉針劑，目前市售的肌氨肽苷藥物組合物也多是以凍干粉針劑的藥劑形式(CN101584713A公開了注射劑，然而該注射劑未作任何穩定性試驗)，這主要是由于肌氨肽苷注射液中的多肽、氨基酸、核苷及核苷酸等物質，在貯藏、運輸、銷售過程中易受到環境因素影響，特別是在我國南方地區的夏季，溫度可達40°C，易造成產品質量不穩定，增加不良反應的發生率(CN1939533B)。另外，由于肌氨肽苷屬于肽類產品，在罐裝后不宜高溫滅菌，否則其活性成分會受到嚴重影響，但不滅菌又容易受到微生物的影響，有效期短，而且容易產生用藥安全。采用凍干粉的方式能夠一定程度上解決注射劑形式的缺陷，然而凍干粉需要繁瑣的制備過程，需要昂貴的設備和已經較高的能耗，綜合制備成本高，而且往往需要加入諸如甘露醇、右旋糖苷、乳糖、山梨醇、枸櫞酸等賦形劑，這些賦形劑或多或少會產生一定的副作用，從而可能會影響用藥安全。

發明內容
本發明的目的在于針對上述不足，提供一種新型肌氨肽苷藥物組合物。為實現上述目的，本發明的技術方案如下—種含肌氨肽苷化合物藥物組合物，其包括以下重量比的成分肌氨肽苷I 5、三氯叔丁醇I 5、磷酸二氫鈉I. 5 2. 5、注射用水500 10000，pH6. O 6. 5。優選包括以下重量比的成分肌氨肽苷2 4、三氯叔丁醇2 4、磷酸二氫鈉I. 8 2. 2、注射用水1000 5000，pH6. 2 6. 4。更優選包括以下重量比的成分肌氨肽苷3、三氯叔丁醇3、磷酸二氫鈉2. O、注射用水1500，pH6. 3。其中所述肌氨肽苷中多肽與次黃嘌呤重量比為5 10 1，優選為7 I。本發明還提供制備上述藥物組合物的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟I)預處理將兔心肌和兔肌肉剔除脂肪和結締組織，洗凈，分別切成小于Icm3的小塊，再次清洗；2)勻漿將經預處理的兔心肌和兔肌肉分別加入2 2. 5倍的純化水，分別制成
2 3微米細度的勻漿；3)凍融將兔心肌勻漿和兔肌肉勻漿反復凍融2 4次，每次于_40°C下深凍4 8小時，并于45°C下解凍；4)除雜將經凍融后的兔心肌勻漿和兔肌肉勻漿分別調節pH至3. O 4. O煮沸10 15分鐘,冷卻，去油層，于2500 3500rpm離心5 IOmin,取上清,沉淀用注射用水溶解后再次于2500 3500rpm離心5 IOmin,取上清,合并上清；5)超濾上清液調節pH6 7，先經I萬道爾頓的超濾器過濾，再經4000道爾頓的超濾器過濾；6)檢測調節檢測兔心肌提取多肽及次黃嘌呤的量以及兔肌肉提取多肽和次黃嘌呤的量，調整混合比例使多肽與次黃嘌呤重量比為5 10 I得到胺基肽苷，如果次黃嘌呤的量不足也可以額外添加次黃嘌呤，補足至所述比例；7)制劑將處方量的三氯叔丁醇、磷酸二氫鈉用注射用水溶解，加入處方量的經調節后的胺基肽苷，混合均勻，加注射用水至全量，并調節pH，精濾后罐裝。本發明肌氨肽苷藥物組合物是注射制劑，其添加了三氯叔丁醇，三氯叔丁醇有抑菌防腐作用，故并發明組合物在罐裝后不需要采取高溫滅菌步驟，可以避免有效成分的損失，另外三氯叔丁醇還有鎮痛作用，可以減輕病人痛楚。通常認為，三氯叔丁醇可能存在過敏等副作用，但在本發明的試驗中并未發現過敏反應，表明其在肌氨肽苷藥物組合物中的應用是安全的。本發明還通過磷酸二氫鈉調節并穩定pH，通過穩定pH以及三氯叔丁醇的聯合應用，使得本發明肌氨肽苷的穩定性明顯增強。另外，本發明藥物組合物在制備過程中使用4kDa的超濾器超濾，可以防止有效成分被濾除。
具體實施例方式以下實施例用于進一步說明本發明，但不應理解為對本發明的限制。在不背離本發明精神和實質的前提下，對本發明所作的修飾或者替換，均屬于本發明的范疇。實施例II)預處理將兔心肌和兔肌肉剔除脂肪和結締組織，洗凈，分別切成小于lcm3的小塊，再次清洗；2)勻漿將經預處理的兔心肌和兔肌肉分別加入2倍的純化水，分別制成2 3微米細度的勻漿；3)凍融將兔心肌勻漿和兔肌肉勻漿反復凍融3次，每次于_40°C下深凍6小時，并于45°C下解凍；
4)除雜將經凍融后的兔心肌勻漿和兔肌肉勻漿分別調節pH至3. 5煮沸15分鐘，冷卻至室溫，去油層，于3000rpm離心lOmin，取上清，沉淀用注射用水溶解后再次于3000rpm離心IOmin,取上清,合并上清；5)超濾上清液調節pH6. 5，先經I萬道爾頓的超濾器過濾，再經4000道爾頓的超濾器過濾；6)檢測調節檢測兔心肌提取多肽及次黃嘌呤的量以及兔肌肉提取多肽和次黃嘌呤的量，調整混合比例使多肽與次黃嘌呤重量比為7 I得到胺基肽苷；7)制劑將三氯叔丁醇3g、磷酸二氫鈉2g用注射用水溶解，加入經調節后的胺基肽苷(多肽及次黃嘌呤含量3g)，混合均勻，加注射用水至1500，并調節pH至6. 3,0. 22 μ m濾月吳過濾后te裝。
實施例2I)預處理將兔心肌和兔肌肉剔除脂肪和結締組織，洗凈，分別切成小于lcm3的小塊，再次清洗；2)勻漿將經預處理的兔心肌和兔肌肉分別加入2. 5倍的純化水，分別制成2 3微米細度的勻漿；3)凍融將兔心肌勻漿和兔肌肉勻漿反復凍融4次，每次于_40°C下深凍4小時，并于45°C下解凍；4)除雜將經凍融后的兔心肌勻漿和兔肌肉勻漿分別調節pH至3. O煮沸10分鐘，冷卻至室溫，去油層，于3500rpm離心5min,取上清,沉淀用注射用水溶解后再次于3500rpm離心5min,取上清,合并上清；5)超濾上清液調節pH6. O，先經I萬道爾頓的超濾器過濾，再經4000道爾頓的超濾器過濾；6)檢測調節檢測兔心肌提取多肽及次黃嘌呤的量以及兔肌肉提取多肽和次黃嘌呤的量，調整混合比例使多肽與次黃嘌呤重量比為5 I得到胺基肽苷；7)制劑將三氯叔丁醇4g、磷酸二氫鈉2. 2g用注射用水溶解，加入經調節后的胺基肽苷(多肽及次黃嘌呤含量5g)，混合均勻，加注射用水至10000，并調節pH至6. O，
O.22 μ m濾膜過濾后罐裝。實施例3I)預處理將兔心肌和兔肌肉剔除脂肪和結締組織，洗凈，分別切成小于lcm3的小塊，再次清洗；2)勻漿將經預處理的兔心肌和兔肌肉分別加入2. 5倍的純化水，分別制成2 3微米細度的勻漿；3)凍融將兔心肌勻漿和兔肌肉勻漿反復凍融2次，每次于_40°C下深凍8小時，并于45°C下解凍；4)除雜將經凍融后的兔心肌勻漿和兔肌肉勻漿分別調節pH至3. O煮沸10分鐘，冷卻至室溫，去油層，于3500rpm離心5min,取上清,沉淀用注射用水溶解后再次于2500rpm離心IOmin,取上清,合并上清；5)超濾上清液調節pH6. O，先經I萬道爾頓的超濾器過濾，再經4000道爾頓的超濾器過濾；
6)檢測調節檢測兔心肌提取多肽及次黃嘌呤的量以及兔肌肉提取多肽和次黃嘌呤的量，調整混合比例使多肽與次黃嘌呤重量比為10 I得到胺基肽苷；7)制劑將三氯叔丁醇2g、磷酸二氫鈉I. Sg用注射用水溶解，加入經調節后的胺基肽苷(多肽及次黃嘌呤含量2g)，混合均勻，加注射用水至1000，并調節pH至6. 2，
O.22 μ m濾膜過濾后罐裝。實施例4本例中的肌氨肽苷注射液的制備方法與實施例I相同，配方為肌氨肽苷lg、三氯叔丁醇2、磷酸二氫鈉I. 5g、注射用水500，pH6. 4。實驗例I :安全性實驗(致敏實驗)
健康豚鼠，體重300±30g，隨機分為6組，每組6只，雌雄各半。按照對照組(按實施例I制備不添加三氯叔丁醇和磷酸二氫鈉)、實驗組I 5組(實施例I 5)分別間日給予腹腔注射注射液O. 5ml/只，連續三次，然后第14天及21天分別攻擊給藥(2ml/只)，立即觀察I小時。結果顯示，對照組和實驗組均未出現明顯異常現象，兩者差異不顯著，表明其過敏反應呈陰性。實驗例2 :穩定性實驗將實施例I 5制備的肌氨肽苷進行澄明度、有關物質及含量等指標的檢測及長期(0、1、3、6個月)穩定性試驗，對照為按照實施例I制備但不添加三氯叔丁醇和磷酸二氫鈉，結果如下表I樣品各項指標檢測結果
權利要求
1.一種含肌氨肽苷化合物藥物組合物，其包括以下重量比的成分肌氨肽苷I 5、三氯叔丁醇I 5、磷酸二氫鈉I. 5 2. 5、注射用水500 10000，pH6. O 6. 5。
2.根據權利要求I所述的藥物組合物，其包括以下重量比的成分肌氨肽苷2 4、三氯叔丁醇2 4、磷酸二氫鈉I. 8 2. 2、注射用水1000 5000，pH6. 2 6. 4。
3.根據權利要求2所述的藥物組合物，其包括以下重量比的成分肌氨肽苷3、三氯叔丁醇3、磷酸二氫鈉2. O、注射用水1500，pH6. 3。
4.根據權利要求I 3任一項所述的藥物組合物，其特征在于，所述肌氨肽苷中多肽與次黃嘌呤重量比為5 10 I。
5.制備權利要求I 4任一項所述藥物組合物的方法，其特征在于，該方法包括如下步 驟 1)預處理將兔心肌和兔肌肉剔除脂肪和結締組織，洗凈，分別切成小于Icm3的小塊，再次清洗； 2)勻漿將經預處理的兔心肌和兔肌肉分別加入2 2.5倍的純化水，分別制成2 3微米細度的勻漿； 3)凍融將兔心肌勻漿和兔肌肉勻漿反復凍融2 4次，每次于-40°C下深凍4 8小時，并于45°C下解凍； 4)除雜將經凍融后的兔心肌勻漿和兔肌肉勻漿分別調節pH至3.O 4. O煮沸10 15分鐘，冷卻，去油層，于2500 3500rpm離心5 lOmin，取上清，沉淀用注射用水溶解后再次于2500 3500rpm離心5 IOmin,取上清,合并上清； 5)超濾上清液調節pH6 7，先經I萬道爾頓的超濾器過濾，再經4000道爾頓的超濾器過濾； 6)檢測調節檢測兔心肌提取多肽及次黃嘌呤的量以及兔肌肉提取多肽和次黃嘌呤的量，調整混合比例使多肽與次黃嘌呤重量比為5 10 I得到胺基肽苷； 7)制劑將處方量的三氯叔丁醇、磷酸二氫鈉用注射用水溶解，加入處方量的經調節后的胺基肽苷，混合均勻，加注射用水至全量，并調節PH，精濾后罐裝。
全文摘要
本發明提供了一種含肌氨肽苷化合物藥物組合物及其制備方法。本發明藥物組合物包括以下重量比的成分肌氨肽苷1～5、三氯叔丁醇1～5、磷酸二氫鈉1.5～2.5、注射用水500～10000，pH6.0～6.5。本發明藥物在制備過程中不經高溫滅菌，多肽純化過程中采用了4kDa的超濾器超濾，對有效成分的保存起到了較好效果。本發明通過添加磷酸二氫鈉調節并穩定pH，并與三氯叔丁醇的聯合應用，使得本發明肌氨肽苷的穩定性明顯增強。
文檔編號A61P9/10GK102847138SQ201210357888
公開日2013年1月2日 申請日期2012年9月25日 優先權日2012年9月25日
發明者羅誠 申請人:羅誠