專利名稱：非甾體消炎藥磷脂囊泡及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一類消炎藥，具體涉及非甾體消炎藥(non-steroidalanti-inflammatory drug，NSAID)。
藥物對粘膜上皮的非直接刺激與NSAID抑制胃腸道分泌前列腺素有關。由于注射給藥時，對胃腸道的損害仍可出現，說明存在另一條副反應途徑。胃粘膜屏障的某些成分(粘液和碳酸氫鹽)的分泌、上皮細胞的更新、粘膜免疫功能及局部供血等均受前列腺素的調節，而多數NSAID進入體循環后主要分布于胃、小腸和腎，由于這些部位的前列腺素合成受抑，胃腸道粘膜出現損傷。依據上述原理，可從兩方面著手降低胃腸道副反應降低對胃腸道的局部刺激將藥物制成腸溶制劑、緩/控釋制劑、對NSAID藥物微粒表面進行修飾、對NSAID進行酯化修飾、服用抗酸劑以降低胃酸分泌等，可在不同程度上緩解NSAID的胃腸道刺激性，但上述措施同時會帶來兩個問題藥物的吸收被推遲到小腸進行，延遲起效；藥物在腸道釋放后，局部高濃度仍可造成潰瘍。
提高對COX2的選擇性COX有兩種同工酶COX1與COX2，NSAID的抗炎作用主要是通過抑制COX2實現的，對COX1的抑制則導致副作用。IC50(COX-2)/IC50(COX-1)的比值將決定藥物的利弊比。遺憾的是，目前多數常用NSAID對COX2的抑制作用都小于對COX1的抑制作用，因此副作用較大。利用COX1與COX2兩種酶分子結構上的差異，可以合成出對COX2選擇性高的NSAID，降低對COX1的作用，從而減輕NSAID的副反應。非特異性COX抑制劑一般分子較小，易通過COX1或COX2的開口進入通道，與120位的精氨酸殘基建立氫鍵結合，從而競爭性阻礙正常底物花生四烯酸的進入，使酶無從發揮催化作用。特異性抑制劑由于帶有一個剛性側鏈(帶苯環，以磺酰基或磺酰胺基為端基)，且整個分子較大，難以進入開口較小的COX1通道，故而不能發揮作用。但此類藥物仍能進入口徑稍大，后段略有柔性的COX2通道，不僅能與120位的精氨酸殘基建立氫鍵，其帶有特殊基團的側鏈還能伸入523位纈氨酸旁的側袋，在此建立共價鍵結合，故而仍能對COX2產生抑制。
盡管已有數個COX2選擇性NSAID上市，如塞來克西(Celebrex)、羅非克西(Vioxx)等，大多數醫生在給患者開COX2選擇性抑制劑時持謹慎態度，因為它們有可能使已出現的潰瘍惡化。COX2選擇性抑制劑近期內難以取代已應用多年的其它非特異性NSAID。
因此，現在比較理想的預防/治療手段只有同服胃粘膜細胞保護劑米索前列醇。如果能依靠制劑手段實現對炎癥部位的靶向給藥，則更為簡便，且具有普適性。
本發明的技術構思是這樣的毛細血管壁內皮細胞間有3nm～20nm的狹縫。急性炎癥時，炎癥部位毛細血管內皮細胞間空隙擴大，可允許200nm以下的粒子透過。炎癥時微血管通透性提高的原因有(1)某些炎性介質，如緩激肽、組胺能直接作用于微血管內皮細胞上的收縮蛋白、微絲，從而使毛細血管與微靜脈的內皮細胞收縮，緊密連接擴大。(2)炎癥時，血液中纖維連接蛋白消耗增加，這樣細胞表面的纖維連接蛋白因補充血中不足而減少，導致微血管完整性破壞。病變狀態下，納米粒子可從毛細血管滲出至組織并長時間滯留的現象稱為EPR效應(enhancedpermeability and retention effect，EPR effect)。
利用炎癥部位毛細血管通透性提高的病理學特點，以將藥物包裹在納米粒內，有可能實現對炎癥部位的被動靶向給藥。LM Lichtenberger等研究發現，NSAID能夠與磷脂復合，并且復合物的消炎作用增強，同時對胃腸道的負作用降低(USP5,955,451 Sept21，1999)。
本發明根據NSAID與磷脂可復合的特點，在USP5,955,451的基礎上，制備了NSAID-磷脂囊泡，經藥理實驗證實，與NSAID溶液相比，它具有消炎作用提高、胃腸道刺激性下降的特點。
本發明的技術方案本發明的NSAID-磷脂囊泡為一種NSAID與磷脂的復合物經處理得到的囊泡，所指的囊泡指的是粒徑為小于1000nm的膠體溶液及其凍干品，最好為小于500nm。
本發明所說的NSAID包括含游離羧基的所有NSAID，包含但不限于以下藥物苯乙酸或苯丙酸類阿氯芬酸、雙氯滅痛、苯氧苯丙酸、托美丁、水楊酰胺、非諾洛芬、氟比洛芬、舒洛芬、苯惡洛芬、布洛芬、酮洛芬、萘普生、奧沙普秦、依托度酸、酮咯酸等。
吲哚類葡美辛、阿西美辛、舒林酸、吲哚美辛等。
芬那酸類 甲氯芬那酸、甲芬那酸。
水楊酸類二氟尼柳、阿斯匹林、貝諾酯等。
吡唑啉酮類羥布宗、保泰松等。
氨基苯甲酸類氟滅酸、甲滅酸、尼氟滅酸。
本發明的制劑可以含有任何來源的藥學上可接受的磷脂包括豆磷脂、卵磷脂以及提純的各種磷脂，磷脂中含有磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、鞘磷脂、神經酰胺等。磷脂中磷脂酰膽堿(PC)的含量在5％～100％(w/w)間。
NSAID與磷脂的投料摩爾比為(以PC的含量計)NSAID∶PC(mol/mol)為0.1～10。
上述的NSAID-磷脂囊泡的制備包括如下步驟將配比量的NSAID與磷脂，溶于有機溶劑中，攪拌均勻，除去有機溶劑，加入緩沖液，使pH范圍為1～10，處理至粒徑降至1000nm以下，成品經6號砂芯漏斗過濾。
處理的方式可為高壓勻質化(壓力范圍為10KPa～100,000KPa)、超聲波處理、加壓經膜擠出等。
所述及的有機溶劑為氯仿、丙酮、二氯甲烷、乙醇、甲醇、正己烷、環己烷中的一種或一種以上。
所說的緩沖液為pH1～10的緩沖液。
本發明的制劑可以通過靜脈注射、皮膚用藥、口服等形式用于需要這種治療的患者。
用于靜脈時，可將其制備成靜脈注射劑、靜脈注射粉針劑；用于皮膚時，可將其制備成透皮帖劑、軟膏；用于口服時，可將其制備成片劑、膠囊、滴丸；用于肺部或鼻腔給藥時，可以制成噴霧劑；用于直腸給藥時，可以制成栓劑；用于眼部給藥時，可以制成滴眼劑等。本發明的各種劑型可以按照藥學領域的常規生產方法進行制備。
本發明制備的NSAID磷脂囊泡的消炎作用，與NSAID相比，可提高0.5～5倍以上；同時，囊泡的胃腸道副作用下降至NSAID的1/3～1/10或更低。
實施例2吲哚美辛囊泡的制備取適量吲哚美辛與磷脂，溶于二氯甲烷，攪拌1h，真空抽去有機溶媒，加入緩沖液，高壓勻質化處理至粒徑降至1000nm以下，成品經6號砂芯漏斗過濾。大部分囊泡外形圓整，稍有一些囊泡外形不規則。囊泡的藥物包裹率在98％以上。
實施例3甲芬那酸囊泡的制備取適量甲芬那酸與磷脂，溶于二氯甲烷，攪拌1h，真空抽去有機溶媒，加入緩沖液，高壓勻質化處理至粒徑降至1000nm以下，成品經6號砂芯漏斗過濾。大部分囊泡外形圓整，也有一些囊泡外形不規則。囊泡的藥物包裹率在97％以上。
實施例4保泰松囊泡的制備取適量保泰松與磷脂，溶于二氯甲烷，攪拌1h，真空抽去有機溶媒，加入緩沖液，高壓勻質化處理至粒徑降至1000nm以下，成品經6號砂芯漏斗過濾。大部分囊泡外形圓整，也有一些囊泡外形不規則。囊泡的藥物包裹率在96％以上。
實施例5氟滅酸囊泡的制備取適量氟滅酸與磷脂，溶于二氯甲烷，攪拌1h，真空抽去有機溶媒，加入緩沖液，高壓勻質化處理至粒徑降至1000nm以下，成品經6號砂芯漏斗過濾。大部分囊泡外形圓整，有一些囊泡外形不規則。囊泡的藥物包裹率在98％以上。
實施例6阿斯匹林囊泡及其凍干品的制備取適量阿斯匹林與磷脂，溶于二氯甲烷，攪拌1h，真空抽去有機溶媒，加入緩沖液，高壓勻質化處理至粒徑降至1000nm以下，成品經6號砂芯漏斗過濾。大部分囊泡外形圓整，有一些囊泡外形不規則。囊泡的藥物包裹率在94％以上。往上述囊泡液中，加入乳糖、甘露醇、海藻糖，經過凍干處理，得到穩定的凍干品。
實施例7囊泡的胃腸道刺激性試驗動物150～180g SD雄性大鼠供試樣品陽性對照組酮洛芬粉末水混懸液(20mg/ml)試驗組酮洛芬粉末+空白磷脂囊泡20mg/ml酮洛芬-磷脂囊泡20mg/ml大鼠空腹48h，每組5只，各灌胃2ml樣品，4h后處死，對胃粘膜損傷目測評分。評分標準以潰瘍指數表示，條索狀損傷的長度大于1mm者測量其長度，每mm計1分；寬度大于1mm者加倍計分。計分總和為該動物的潰瘍指數。
表1 胃刺激性試驗結果

★與酮洛芬相比p＜0.01▲與酮洛芬粉末+空白磷脂囊泡p＜0.01大鼠灌胃給藥后，對胃粘膜的損傷由大到小依次為酮洛芬＞＞酮洛芬+PC囊泡＞＞酮洛芬-PC囊泡，表明囊泡對胃粘膜的刺激性顯著低于酮洛芬原料，且這種保護作用并不是由于磷脂阻礙了酮洛芬與胃粘膜接觸，而是歸功于酮洛芬與PC的復合作用。
囊泡對胃的損傷顯著降低，主要原因有①對胃粘膜的直接刺激降低NSAID原料給藥后，與胃粘膜的磷脂復合，將疏水性粘膜轉化為親水性，導致胃酸逆向擴散，造成損傷。與PC復合后，NSAID與胃粘膜的磷脂發生相互作用的機會下降，且研究發現，復合物由于脂溶性提高，在pH2.0緩沖液-正辛醇系統的Ko/w是NSAID的2倍，復合物可快速離開胃粘膜入血。
②對COX-2的選擇性提高 NSAID與PC復合后，分子體積變大，難以進入COX-1酶的內腔，對COX-1的作用下降，可緩解由COX-1引起的胃腸道全身副作用。
③整體劑量降低由于藥效提高，可望降低整體使用劑量，因此對胃腸道的副作用能進一步得到緩解。
實施例8囊泡的消炎作用動物150～180g SD雄性大鼠供試樣品陰性對照組生理鹽水陽性對照組酮洛芬溶液(pH10.0，3mg/ml)試驗組酮洛芬-磷脂囊泡3mg/ml模型對大鼠的右后足趾皮下注射含2.5％甲醛的生理鹽水0.1ml致炎，1h后尾靜脈注射供試樣品1ml(n＝5)，用排水法測定致炎前、給藥后1.5h、3.0h、4.5h大鼠致炎足趾體積，計算腫脹率與抑制率。
結果表2 大鼠灌胃給藥的消炎作用(n＝5)

▲與酮洛芬溶液相比p＜0.05 ★與酮洛芬隱性囊泡相比p＜0.05表3大鼠靜脈注射給藥的消炎作用 (n＝5)

★與酮洛芬溶液相比p＜0.01以酮洛芬溶液為對照計算相對抑制率以比較兩種給藥途徑間的差異

表4不同給藥途徑對相對抑制率的影響

可見無論靜脈注射或灌胃給藥，在甲醛致大鼠炎癥爪的模型上，囊泡的消炎作用遠高于酮洛芬溶液，同時高于隱性囊泡，且靜脈注射的消炎作用更強。藥效提高的原因NSAID到達COX靶酶而發揮藥效的整個路徑為①進入血循環后，到達炎癥部位的毛細血管，②從變寬的內皮細胞連接處滲出，③透過炎癥細胞膜，④進入COX疏水性內腔而發揮抑制酶活性的作用。根據實驗結果，結合NSAID在體內的轉運路徑，可以從宏觀至微觀逐個層次來分析囊泡的藥效高于溶液劑的原因①吸收入血加快 由于pH2.0時酮洛芬-PC復合物的Ko/w為酮洛芬的2倍，因此在胃部被吸收入血的速度與程度均得到提高。藥效試驗也顯示，兩種給藥途徑中囊泡均優于溶液，灌胃給藥時囊泡的藥效提高的幅度高于靜注給藥。
②透過炎癥性細胞的細胞膜的能力提高 酮洛芬的蛋白結合率在99％以上，因此酮洛芬在體內主要以酮洛芬-白蛋白結合體的形式存在。由于親水性提高，酮洛芬-白蛋白結合體難于透過細胞膜，與靶酶接觸的幾率下降。酮洛芬-PC的脂溶性提高，利于其跨膜轉運。隱性囊泡的藥效下降，證明隱性修飾不利于炎癥細胞捕獲囊泡。
③更易進入COX靶酶 COX1與COX2都有一個發夾狀(hairpinshaped)結構，中間是一條狹長的疏水性通道。在催化前列腺素合成時，底物花生四烯酸自通道口旁磷脂膜上釋放出來，隨即被吸入通道內，在發夾狀的頂部發生扭轉，插入兩個氧原子，抽去一個自由基，構成前列腺素結構中的五碳環，并轉化為前列腺素G2與前列腺素H2。由于酮洛芬-磷脂復合物的脂溶性提高，更易進入COX疏水性內腔，對靶酶的作用增強；而酮洛芬-白蛋白結合體即使滲入細胞膜，也難以進入COX的疏水性內腔，因此難以發揮藥效。
權利要求
1.一種非甾體消炎藥磷脂囊泡，為一種NSAID與任何來源的藥學上可接受的磷脂的復合物，其特征在于，該復合物為一種囊泡，其粒徑小于1000nm。
2.根據權利要求1所述的非甾體消炎藥磷脂囊泡，其特征在于，囊泡粒徑小于500nm。
3.根據權利要求1所述的非甾體消炎藥磷脂囊泡，其特征在于，囊泡為膠體溶液及其凍干品。
4.根據權利要求2所述的非甾體消炎藥磷脂囊泡，其特征在于，囊泡為膠體溶液及其凍干品。
5.根據權利要求1～4任一項所述的非甾體消炎藥磷脂囊泡，其特征在于磷脂中磷脂酰膽堿(PC)的含量為5％～100％(w/w)，NSAID與磷脂的摩爾比以PC的含量計為NSAID∶PC＝0.1～10。
6.根據權利要求1所述的非甾體消炎藥磷脂囊泡，其特征在于所說的NSAID包括含游離羧基的所有NSAID。
7.根據權利要求6所述的非甾體消炎藥磷脂囊泡，其特征在于所說的NSAID包含但不限于以下類藥物苯乙酸或苯丙酸類、吲哚類、芬那酸類、水楊酸類、吡唑啉酮類或氨基苯甲酸類。
8.根據權利要求7所述的非甾體消炎藥磷脂囊泡，其特征在于NSAID包含但不限于以下藥物阿氯芬酸、雙氯滅痛、苯氧苯丙酸、托美丁、水楊酰胺、非諾洛芬、氟比洛芬、舒洛芬、苯惡洛芬、布洛芬、酮洛芬、萘普生、奧沙普秦、依托度酸、酮咯酸、葡美辛、阿西美辛、舒林酸、吲哚美辛、甲氯芬那酸、甲芬那酸、二氟尼柳、阿斯匹林、貝諾酯、羥布宗、保泰松、氟滅酸、甲滅酸或尼氟滅酸。
9.根據權利要求1～8任一項所述的NSAID-磷脂囊泡的制備方法包括如下步驟將配比量的NSAID與磷脂，溶于有機溶劑中，攪拌，除去有機溶劑，加入緩沖液，使pH范圍為1～10，處理至粒徑降至1000nm以下，過濾。
10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于所述及的處理的方式包括高壓勻質化、超聲波處理或加壓經膜擠出。
11.根據權利要求10所述的方法，其特征在于高壓勻質化壓力范圍為10Kpa～100,000Kpa。
12.根據權利要求9所述的方法，其特征在于所述及的有機溶劑為氯仿、丙酮、二氯甲烷、乙醇、甲醇、正己烷、環己烷中的一種或一種以上。
全文摘要
本發明公開了一種非甾體消炎藥磷脂囊泡及其制備方法。本發明的NSAID－磷脂囊泡為一種NSAID與磷脂的復合物經處理得到的囊泡，所指的囊泡指的是粒徑為小于1000nm的膠體溶液及其凍干品，本發明所說的NSAID包括含游離羧基的所有NSAID，NSAID與磷脂的投料摩爾比為(以PC的含量計)NSAID∶PC＝0.1～10。NSAID－磷脂囊泡的制備包括如下步驟將配比量的NSAID與磷脂，溶于有機溶劑中，攪拌均勻，除去有機溶劑，加入緩沖液，使pH范圍為1～10，處理至粒徑降至1000nm以下，成品經6號砂芯漏斗過濾。本發明制備的NSAID磷脂囊泡的消炎作用，與NSAID相比，可提高0.5～5倍；同時，囊泡的胃腸道副作用下降至NSAID的1/3～1/10。
文檔編號A61P29/00GK1415284SQ0213768
公開日2003年5月7日 申請日期2002年10月29日 優先權日2002年10月29日
發明者瞿文, 陳慶華, 朱寶泉 申請人:上海醫藥工業研究院