專利名稱：蒼術總萜醇提取物在制備抗幽門螺桿菌藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及蒼術總萜醇提取物，尤其涉及在制備抗幽門螺桿菌藥物中應用。
背景技術：
蒼術具有悠久的臨床應用歷史，中醫認為其性溫，味辛、苦，歸脾、胃、肝經，具有健脾燥濕的作用，主要用于濕困脾土、脘痞腹脹、食欲不振、嘔吐、腹瀉、瘧疾、痰飲、水腫等癥的治療。健脾燥濕是中醫治療消化性潰瘍的常用治法之一。蒼術總萜醇提取物為從菊科植物茅蒼術干燥根莖中提取得到的以茅術醇和P-桉葉醇為主要活性成分的總萜醇，臨床擬用于消化性潰瘍。消化性潰瘍會導致胃酸分泌過多，胃粘膜的抵抗力下降，或兩者兼而有之。消化性 潰瘍形成的主要原因是當胃酸的分泌相對地超過了胃分泌的粘液對胃的保護能力和(或)堿性的十二指腸液中和胃酸的能力時，含有胃蛋白酶和低PH值的胃液會使胃壁消化，就會發生消化性潰瘍。利用現代藥理研究，對蒼術有效成分的胃潰瘍藥效篩選證實，蒼術總萜醇提取物中茅術醇對H+，K+-ATP酶有較強的抑制作用，當茅術醇濃度到達1. 0 X 10_5M，就對H+，K+-ATP酶產生抑制作用，當茅術醇濃度為4. 0 X 10_4M則能完全抑制H+，K+-ATP酶，其對Na+-ATP酶，Mg2+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、H+-ATP酶亦有一定的抑制作用。茅術醇、P -桉葉醇對幽門結扎潰瘍、阿司匹林所致的胃潰瘍均有抑制作用。然而，茅術醇和￠-桉葉醇抗潰瘍機理并不一致，茅術醇是質子泵抑制劑，3 -桉葉醇是組胺H2受體阻斷劑，兩個倍半萜醇類化合物協同作用而抑制胃液分泌，從而發揮抗潰瘍的作用。消化性潰瘍的主要原因之一是幽門螺桿菌，幽門螺桿菌感染是慢性活動性胃炎、消化性潰瘍、胃黏膜相關淋巴組織(MALT)淋巴瘤和胃癌的主要致病因素。1994年世界衛生組織/國際癌癥研究機構將幽門螺桿菌定為I類致癌原。目前國內外常用的抗幽門螺桿菌藥物有胃復春片、羥氨芐青霉素、四環素、強力霉素、呋喃唑酮、有機鉍、胃得樂、樂得胃等，但由于口服，胃酸的環境使藥效大大受到影響。目前，消化性潰瘍采用質子泵抑制劑或H2受體拮抗劑聯合兩種抗生素的“三聯療法”原則，療程一般為2周，但又有耐藥性問題的產生。因此，替換性治療或預防策略值得重視。感染幽門螺桿菌(HP)會導致慢性胃炎和腸胃潰瘍病。如今，領域內已有如下共識(1)胃黏膜正常的志愿者，口服HP混懸液可造成胃炎癥狀和病理改變。(2)患慢性胃炎時HP檢出率非常高，而胃黏膜正常者則不能檢出此菌。(3)慢性胃炎病人血清中HP抗體明顯增高，胃液中可檢出抗HP免疫球蛋白，這表明HP是有致病性的抗原(病原體)。(4)針對HP進行治療，會使慢性胃炎病人胃黏膜明顯改善。(5)60%-80%的胃潰瘍和70%-100%的十二指腸潰瘍病人的胃竇部可檢出HP，血清學檢查證實，這些人血清HP抗體滴度較高。(6)用傳統抗潰瘍藥物治療無效的難治性潰瘍，改用抗HP藥物治療后，大多數潰瘍能愈合。(7)用HP感染恒河猴，能讓之發生慢性胃炎，胃黏膜的病理改變與人類感染相似，即制備HP胃炎動物模型獲得了成功。以上說明，HP與慢性胃病有相關性是確鑿無疑的。HP肯定是慢性胃炎的致病菌，與潰瘍病和胃癌關系也極為密切。即是說，HP是引發慢性胃病的元兇和罪魁禍首。
申請人的中國專利申請200810239177.1名稱為蒼術總萜醇提取物及其制備方法和用途的后續發明。中國專利申請200810239177.1公開了蒼術總萜醇提取物為通過提取、精制步驟從菊科植物蒼術Atractylis Iancea和/或Atractylodes chinensis (Atractylodes lancea DC. var. chinensis Kitam.)的干燥根莖中獲得的富含蒼術倍半萜醇的提取物，所述蒼術總萜醇提取物的組成成分為(I)蒼術醇的含量范圍為65% 95%重量，其中，所述蒼術醇為茅術醇與β -桉葉醇的混合物，兩者比例為I O. 5 2 ;(2)蒼術素的含量為2. 5% 20%重量；以及(3)余量的其他倍半萜醇類、倍半萜烯及聚炔類化合物；其中，倍半萜烯的總含量不超過2%重量。上述的總萜醇提取物可以有效保留和突出提取物的藥理藥效學作用，同時也大幅度降低提取物的急性毒性以及與刺激性相關的副作用。
綜上所述，目前技術領域內認為，蒼術總萜醇提取物中的茅術醇和桉葉醇具有抑制H+，Κ+-ΑΤΡ酶的作用，以發揮抑制胃酸分泌的作用，從而達到抗消化性潰瘍的作用。 然而蒼術總萜醇提取物具有抗幽門螺桿菌性質并未被發現與應用。這阻礙了蒼術總萜醇提取物在治療其他胃病以及其他由幽門螺桿菌引發疾病的藥物研發與應用。
發明內容
本發明的目的在于提供一種蒼術總萜醇提取物的新用途，即在在制備抗幽門螺桿菌藥物中的應用。本發明人是在驗證蒼術總萜醇提取物具有抑制胃酸分泌作用的同時，發現蒼術總萜醇提取物具有抗幽門螺桿菌的作用，且抗菌活性隨培養基PH值的降低而增強。 本發明所述的蒼術總萜醇提取物為通過提取、精制步驟從菊科植物蒼術的干燥根莖中獲得的富含蒼術倍半萜醇的提取物。
所述蒼術總萜提取物的組成成分為
(I)蒼術醇的含量范圍為509Γ90%重量，其中，所述蒼術醇為茅術醇與β-桉葉醇的混合物，兩者比例為1:0. 5^2；
(2)蒼術素的含量為2· 5°/Γ20%重量；以及
(3)余量的其他倍半萜醇類、倍半萜烯及聚炔類化合物；其中，倍半萜烯的含量不超過2%重量。
其具有體外抗幽門螺旋桿菌的活性，其活性隨培養基pH值條件的降低而增強。該提取物從具有悠久應用歷史的中藥材中得到，副作用小。
蒼術總萜醇提取物對臨床分離的幽門螺旋桿菌有體外抑制作用，蒼術總萜醇提取物 70% (蒼術醇含量 70%)的 MIC 范圍為 O. 16 2. 56mg/ml, MIC50 值為 O. 64mg/ml, MIC90 值為2. 56mg/ml。當培養基PH條件由7. 2降低至2. O時，蒼術總萜醇提取物對幽門螺旋桿菌的抗菌活性增強，其MIC5。值由O. 64mg/ml降低至O. 32mg/ml, MIC9。值由2. 56mg/ml降低至O.64mg/ml
本發明的積極效果是蒼術總萜醇提取物不僅具有抑制胃酸分泌的作用，而且具有抗幽門螺旋桿菌的活性，抗菌活性隨培養基PH值得降低而增強，阻斷消化性潰瘍兩大致病因素，即胃酸分泌過多和幽門螺旋桿菌。
具體實施例方式下面將描述本發明的幾個實施例，但本發明的內容完全不局限于此。(幾個提取物制備方法相同，成品含量近似，刪除了原來的實施例1)實施例1蒼術總萜醇提取物的制備采用生品矛蒼術干燥根莖，粉碎，過篩2kg，放進蒸餾裝置中，加正己烷IOL回流提取lh，提取3次，合并提取液，減壓回收溶劑得油狀提取物。然后減壓(精餾精制設置精餾塔塔柱直徑80mm，填料2. 0X2. Omm的高效不銹鋼0環，有效填料段高度1. 5m ;塔釜容積5L，采用外循環導熱油系統加熱，加熱總功率20kw，功率可調；塔頂冷凝器為蛇管式，換熱面積0. 5m2 ;真空泵，抽氣速率lOL/s，極限真空20Pa)。蒼術水蒸氣蒸餾提取物200·g，裝入塔釜，循環水冷卻，抽真空，使系統壓カ維持在8mmHg，外循環導熱油系統加熱使塔釜梯度升溫。根據預實驗結果，收集12(T180°C餾分。經GC-MS測定蒼術總萜醇提取物(茅術醇和^ -桉葉醇兩者含量之和)含量為77. 5%。均質后，裝入藥瓶密封，消毒制成產品。實施例2蒼術總萜醇提取物的制備采用生品矛蒼術干燥根莖，粉碎，過篩，取2. 5kg。置于ニ氧化碳超臨界萃取設備中，進行連續萃取3h。萃取條件萃取壓カ為15MPa，萃取溫度為40°C，分離壓カ為5 6MPa，分離溫度為45°C。然后減壓(精餾精制設置精餾塔塔柱直徑80mm，填料2. 0X2. Omm的高效不銹鋼9環，有效填料段高度1. 5m;塔釜容積5L，采用外循環導熱油系統加熱，加熱總功率20kw，功率可調；塔頂冷凝器為蛇管式，換熱面積0. 5m2 ;真空泵，抽氣速率lOL/s，極限真空20Pa)。蒼術水蒸氣蒸餾提取物200g，裝入塔釜，循環水冷卻，抽真空，使系統壓カ維持在8mmHg，外循環導熱油系統加熱使塔釜梯度升溫。根據預實驗結果，收集12(Tl8(TC餾分。經GC-MS測定蒼術總萜醇提取物(茅術醇和P -桉葉醇兩者含量之和)含量為89. 6%。均質后，裝入藥瓶密封，消毒制成產品。實施例3蒼術總萜醇提取物的制備采用炮制矛蒼術干燥根莖，粉碎，過篩2. 5kg，放進蒸餾裝置中，水蒸氣蒸餾提取8h，使油水分離，收集揮發油。然后減壓(精餾精制設置精餾塔塔柱直徑80mm，填料2.0X2. Omm的高效不銹鋼0環，有效填料段高度1. 5m ;塔釜容積5L，采用外循環導熱油系統加熱，加熱總功率20kw，功率可調；塔頂冷凝器為蛇管式，換熱面積0. 5m2 ;真空泵，抽氣速率lOL/s，極限真空20Pa)。蒼術水蒸氣蒸餾提取物200g，裝入塔釜，循環水冷卻，抽真空，使系統壓カ維持在8mmHg，外循環導熱油系統加熱使塔釜梯度升溫。根據預實驗結果，收集12(Tl80°C餾分。經GC-MS測定蒼術總萜醇提取物(茅術醇和P -桉葉醇兩者含量之和)含量為50. 5%。均質后，裝入藥瓶密封，消毒制成產品。為更好的理解本發明的實質，下面將用不同含量蒼術總萜醇提取物體外抗幽門螺桿菌MIC值測定試驗及結果說明其在制備抗幽門螺旋桿菌藥物中的應用。實施例4不同蒼術醇含量的蒼術總萜醇提取物體外抗幽門螺桿菌MIC值測定試驗內容及其結果如下(I)受試樣品為樣品1-1 :蒼術總萜醇提取物50%提取物(蒼術醇含量50%)。樣品1-2 :蒼術總萜醇提取物70%提取物(蒼術醇含量70%)。樣品1-3 :蒼術總萜醇提取物90%提取物(蒼術醇含量90%)。樣品2:胃復春片。樣品3:克拉霉素。
(2)實驗菌株選取臨床分離幽門螺桿菌40株，幽門螺桿菌標準菌株ATCC43504為質控菌株，菌株由三甲醫院分離并鑒定。(3)試驗方法含藥平板的制備樣品I含藥平板的制備精密稱取樣品819. 2mg，置于無菌試管，加入0. 5mlDMS0,輕輕振蕩使全部溶解，繼續加入無菌水至8ml，得102. 4mg/ml溶液，取4ml加入4ml無菌水，得51. 2mg/ml溶液；同法依次取4ml加入4ml無菌水系列倍比稀釋，得濃度分別為25. 6、12. 8,6. 4,3. 2、1. 6,0. 8,0. 4,0. 2mg/ml 的系列樣品溶液。分別取上述樣品溶液Iml加入9cm無菌平板，加入幽門螺桿菌固體培養基9ml，立即混勻，置水平臺待凝后得到濃度依次為2. 56、1. 28,0. 64,0. 32,0. 16,0. 08,0. 04,0. 02mg/ml的含藥平板。胃復春片含藥平板制備取胃復春片五片，無菌操作研磨成細粉末，精密稱取 1024mg,加入無菌水10ml，置60°C水浴恒溫2小時，于4°C冰箱放置24小時，無菌操作濾除殘渣，于100°C加熱15分鐘滅菌，補足無菌水至10ml，得相當于原藥102. 4mg/ml的提取液，取4ml加入4ml倍比稀釋,得51. 2mg/ml稀釋液，同法依次取4ml加入4ml無菌水系列倍比稀釋，得濃度分別為25. 6、12. 8,6. 4,3. 2、1. 6,0. 8,0. 4,0. 2mg/ml的系列稀釋液。分別取上述樣品溶液Iml加入9cm無菌平板，加入幽門螺桿菌固體培養基9ml，立即混勻，置水平臺待凝后得到濃度依次為 5. 12,2. 56、1. 28,0. 64,0. 32,0. 16,0. 08,0. 04,0. 02mg/ml 的含藥平板?？死顾睾幤桨逯苽淙】死顾?0片，測定平均片重，無菌操作研磨成細粉末，精密稱取適量(約相當于128mg克拉霉素)，置IOOml滅菌容量瓶，加入無水乙醇約20ml溶解，加入PH6. 5磷酸鹽緩沖液定容，得1280ug/ml克拉霉素溶液，取4ml加入4ml磷酸鹽緩沖液系列倍比稀釋，得濃度分別為 640、320、160、80、40、20、10、5、2. 5、1. 25,0. 625,0. 3125、0. 156ug/ml的系列稀釋液；分別取上述樣品溶液Iml加入9cm無菌平板，加入幽門螺桿菌固體培養基9ml，立即混勻，置水平臺待凝后得到濃度依次為8、4、2、1、0. 5,0. 25,0. 125、0. 06,0. 03,0. 015ug/ml 的含藥平板。(4)菌懸液制備取試驗菌株，接種幽門螺桿菌平板培養基，37°C培養48小時，用接種環刮取菌苔至無菌生理鹽水，混旋儀混勻后與麥氏比濁管比濁，約為lX108cfu/ml。(5)接種及培養將試驗菌懸液按順序加入96孔板相應孔內，放置于多點接種儀。取已制備的各含藥平板按濃度由低至高順序接種。于37°C培養48小時，取出觀察結果，記錄生長狀況。(6)試驗結果DMSO溶劑培養基對照平板生長結果各臨床菌株在DMSO濃度分別0. 156%、
0.078%,0. 039%,0. 0195%的平板培養基均能生長良好，菌落形態及鏡檢結果均符合幽門螺旋桿菌特征。樣品及對照藥物對臨床菌株的MIC測定結果見表1，各藥物的MIC5(1、MIC90及MICe值統計結果見表2表I蒼術總萜醇提取物對臨床菌株的MIC測定結果
權利要求
1.一種蒼術總萜醇提取物在制備抗幽門螺桿菌藥物中的應用，所述的蒼術總萜醇提取物為通過提取、精制步驟從菊科植物蒼術的干燥根莖中獲得的富含蒼術倍半萜醇的提取物，所述蒼術總萜提取物的組成成分按重量比(W/V)計(1)蒼術醇的含量范圍為50°/Γ90%，其中，所述蒼術醇為茅術醇與β-桉葉醇兩者重量比為1:0. 5^2的混合物；(2)蒼術素的含量為2.5°/Γ20% ；(3)余量是其他倍半萜醇類、倍半萜烯及聚炔類化合物；其中，倍半萜烯的含量不超過2%重量。
2.如權利要求1所述的蒼術總萜醇提取物在制備抗幽門螺桿菌藥物中的應用，其特征是所述的蒼術醇的含量為70%。
全文摘要
本發明涉及蒼術總萜醇提取物，尤其涉及在制備抗幽門螺桿菌藥物中應用。所述的蒼術總萜醇提取物為通過提取、精制步驟從菊科植物蒼術的干燥根莖中獲得的富含蒼術倍半萜醇的提取物。蒼術總萜醇提取物不僅具有抑制胃酸分泌的作用，而且具有抗幽門螺旋桿菌的活性，抗菌活性隨培養基pH值的降低而增強，從而阻斷消化性潰瘍兩大致病因素，即胃酸分泌過多和幽門螺旋桿菌。
文檔編號A61P31/04GK103006736SQ20121050130
公開日2013年4月3日 申請日期2012年11月30日 優先權日2012年11月30日
發明者梁慧, 嚴啟新, 曾偉珍, 康暉 申請人:深圳海王藥業有限公司