專利名稱：骨肽注射液及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種注射液的制備方法，尤其涉及一種骨肽注射液的制備方法及由該制備方法得到的產品，屬于藥物領域。
背景技術：
骨肽注射液(骨寧注射液)提取自哺乳動物例如豬或牛的四肢骨，自1976年由南京生化藥廠開發出來后，已在臨床使用了近30年，主要用于治療各種關節炎，能消炎止痛，療效確切。近年來，所發現的骨肽注射液的治療范圍越來越廣，如用于治療骨質疏松(劉維潤等，濱州醫學院學報，第26卷第6期，2003，pp395)，也用于治療四肢長骨骨折不愈合(薛云峰，河南外科學雜志，第10卷第2期，2004，pp16～17)。隨著近年來分子藥理學研究的深入，發現從哺乳動物例如豬或牛的四肢骨提取液中含有多種活性多肽物質，這些活性多肽能調節骨代謝，刺激成骨細胞增殖，促進新骨形成并調節鈣、磷代謝，增加骨鈣沉積，所以還可防治骨質疏松和骨折，其臨床用途正在不斷擴大。
骨肽注射液的傳統制備方法除存在工藝復雜、步驟煩瑣等缺陷外(參見《動物生化制藥學》P283，人民衛生出版社出版，1981年版)，且其有效成分骨肽含量較低，雜質較多，限制了其有效應用。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種新的骨肽注射液，該骨肽注射液生產周期短、制備工藝簡捷，有效成分骨肽含量高，且雜質含量少。
本發明所要解決的技術問題是通過以下技術途徑來實現的本發明的骨肽注射液，可以由以下方法制備而成
1、將新鮮或冷凍保存的哺乳動物骨，洗凈打碎稱重，碎骨用鹽水熱壓煮提一次或多次，離心過濾，合并煮提液，放至室溫；將煮提液在在-4～8℃的低溫下放置1～40小時，然后去除表層脂肪，將提取液溫熱后離心過濾，收集濾液備用；2、將濾液真空濃縮，攪拌下加入為濾液重量1～5倍的95％乙醇，靜置沉淀完全后，虹吸出上層醇液，定容回收乙醇，水提液留用；3、將水提液直接或者加等體積蒸餾水，依次通過弱酸性陽離子樹脂柱、弱堿性陰離子樹脂柱、珠狀殼聚糖柱和殼聚糖改性活性炭柱，去雜純化，得純凈稀藥液；4、將純凈稀藥液濃縮后，加壓過微孔濾膜，將濾液灌裝、熔封、熱壓滅菌即得，或者，為了制備凍干粉針劑，可以將純凈稀藥液經過常規方法冷凍干燥，得到凍干粉，制得骨肽注射液凍干粉針劑。
將藥液進行凍干處理時，凍干方法沒有限制，可以使用常規的凍干技術，例如冷凍凍干生產法，溶媒結晶生產法。
上述制備方法中，其中步驟1)中所述的哺乳動物骨優選豬或牛的四肢骨；碎骨用鹽水熱壓煮提兩次；所用鹽水的濃度為0.15～0.2M；將煮提液在在-4～8℃的低溫下優選放置8小時以上；步驟2)中優選攪拌下加入為濾液重量2～3倍的95％乙醇；步驟4)中優選將純凈稀藥液濃縮至骨原料投料重的0.5～0.8倍，更優選為0.67倍(V/W)；步驟4)中將純凈稀藥液濃縮后，加壓過0.2um微孔濾膜。
本發明的優點本發明骨肽注射液其有效成分—骨肽含量高，雜質少，其制備工藝簡捷，生產周期短，非常有利于大規模工業化生產。
以下通過實施例來進一步描述本發明的有益效果，應該理解的是，這些實施例僅用于例證的目的，決不限制本發明的范圍。
具體實施例方式取新鮮豬四肢骨，洗凈打碎，稱50kg，加100L 0.15mol的NaCL溶液，于0.12兆帕，123℃熱壓提取2h，100目細布離心過濾，骨渣同樣條件再提取一次過濾，合并兩次濾液，得提取液200L；水提液先放至室溫后，轉放于冷藏室內4℃下存放過夜，次日除盡上層脂肪，下部提取液微溫熱后100目細布離心過濾；過濾液入真空濃縮罐，濃縮至35L時，放出降溫，攪拌下加入70L95％的乙醇，攪拌10min，靜置，待沉淀完全后，虹吸出上清醇液；將醇液回收乙醇至70L，余水藥液約34L；向水藥液中加入34L蒸餾水，攪勻后，依次通過弱酸性陽離子樹脂柱(7kg)，弱堿性陰離子樹脂柱(10kg)，珠狀殼聚糖柱(3kg)，殼聚糖改性活性炭柱(3kg)，均控制流速5ml/min.cm2；將過柱后稀藥液裝入真空濃縮罐，濃縮至33.5L，用藥液泵加壓過0.2um微孔濾膜，將濾液灌裝，2ml/支，熔封，115℃熱壓滅菌30min，得16750支。
經檢測(檢測方法參照國家藥品標準WS1-XG-035-2000項下含量測定檢驗)，本實施例所制備的注射液中每毫升的骨肽含量為8mg；而采用現有技術所制備的骨肽注射液中，每毫升注射液中骨肽含量為6mg。
1、取冷凍保鮮的羊四肢骨，解凍后，洗凈、打碎，稱100kg，加200L 0.2mol的NaCL水，于0.122兆帕，125℃條件下熱壓提取1.5h，用100目濾布離心過濾。骨渣同樣條件再提取一次，甩濾，合并兩次濾液，得提取液400L。
2、水提液放至室溫后，轉移到冷藏室內-4℃下存放過夜。次日除去上層脂肪，下方提取液微溫熱后，用100目濾布離心甩濾。
3、過濾液裝入真空濃縮罐，濃縮至70L時，放出藥液降溫，于攪拌下加入150L 95％的乙醇，攪拌10min，靜置，待沉淀完全后，虹吸出上清醇液。
4、將醇液裝入酒精回收塔，回收乙醇至150L，放出所余水藥液約67L。
5、向水藥液中加入67L蒸餾水，攪勻后，依次通過弱酸性陽離樹脂柱(裝量14kg)，弱堿性陰離子樹脂柱(裝量20kg)，珠狀殼聚糖柱(裝量6kg)，殼聚糖改性活性炭柱(裝量6kg)，均控制流速為5ml/min.cm2。
6、將過柱后的稀藥液轉移至真空濃縮罐中，濃縮至67L，用藥液泵加壓通過0.2mm的微孔濾膜。
7、灌裝，2ml/支，熔封，115℃熱壓滅菌30min，得產品33500支，含量2ml12mg。
經檢測(檢測方法參照國家藥品標準WS1-XG-035-2000項下含量測定檢驗)，本實施例所制備的注射液中每毫升的骨肽含量為8mg；而采用現有技術所制備的骨肽注射液中，每毫升注射液中骨肽含量為6mg。
1、取冷凍保鮮的牛四肢骨，解凍后，洗凈、打碎，稱100kg，加200L 0.18mol的NaCL水，于0.122兆帕，125℃條件下熱壓提取1.5h，用100目濾布離心過濾。骨渣同樣條件再提取一次，甩濾，合并兩次濾液，得提取液400L。
2、水提液放至室溫后，轉移到冷藏室內8℃下存放過夜。次日除去上層脂肪，下方提取液微溫熱后，用100目濾布離心甩濾。
3、過濾液裝入真空濃縮罐，濃縮至70L時，放出藥液降溫，于攪拌下加入200L 95％的乙醇，攪拌10min，靜置，待沉淀完全后，虹吸出上清醇液。
4、將醇液裝入酒精回收塔，回收乙醇至200L，放出所余水藥液約67L。
5、向水藥液中加入67L蒸餾水，攪勻后，依次通過弱酸性陽離樹脂柱(裝量14kg)，弱堿性陰離子樹脂柱(裝量20kg)，珠狀殼聚糖柱(裝量6kg)，殼聚糖改性活性炭柱(裝量6kg)，均控制流速為5ml/min.cm2。
6、將過柱后的稀藥液轉移至真空濃縮罐中，濃縮至67L，用藥液泵加壓通過0.2mm的微孔濾膜。
7、灌裝，2ml/支，熔封，115℃熱壓滅菌30min，得產品33500支。
經檢測(檢測方法參照國家藥品標準WS1-XG-035-2000項下含量測定檢驗)，本實施例所制備的注射液中每毫升的骨肽含量為8mg；而采用現有技術所制備的骨肽注射液中，每毫升注射液中骨肽含量為6mg。
本發明骨肽注射液治療膝關節骨性關節炎臨床療效觀察試驗將32例膝關節骨性關節患者隨機分為兩組，一組為治療組，16人；另一組為對照組，16人；治療組每天在關節腔內注射本發明實施例1所制備的骨肽注射液3ml，每周1次，對照組注射市售骨肽注射4ml，每周2次。治療一個月，隨訪3個月，根據Goidberg VM及Legnesne MG的膝關節骨性關節炎臨床評估指數分表進行評分，然后根據治療前后的積分差，評定療效。以治療前后肌膚差大于50分為優，30～49分為良，10～29分為可，小9分為差，結果見表1。
表1 治療的結果比較

由表1可見，本發明骨肽注射液與現有市售骨肽注射液相比，在用量較少的情況下，療效更高。
權利要求
1.一種制備骨肽注射劑的方法，包括以下步驟1)、將哺乳動物骨用鹽水熱壓煮提一次或多次，離心過濾，合并煮提液，在-4～8℃的低溫下放置1～40小時，去除表層脂肪，將提取液溫熱后離心過濾，收集濾液備用；2)、將濾液真空濃縮，攪拌下加入為濾液重量1～5倍的95％乙醇，靜置沉淀完全后，虹吸出上層醇液，水提液留用；3)、將水提液依次通過弱酸性陽離子樹脂柱、弱堿性陰離子樹脂柱、珠狀殼聚糖柱和殼聚糖改性活性炭柱，得純凈稀藥液；4)、將純凈稀藥液濃縮后，加壓過微孔濾膜，將濾液灌裝、熔封、熱壓滅菌得到骨肽注射液；或者將純凈稀藥液經冷凍干燥，得到凍干粉，得骨肽凍干粉針劑。
2.按照權利要求1的制備方法，其特征是步驟1)中所述哺乳動物骨為豬、?；蜓虻乃闹?。
3.按照權利要求1的制備方法，其特征是步驟1)中所用鹽水的濃度為0.15～0.2M。
4.按照權利要求1的制備方法，其特征是步驟1)中將哺乳動物骨用鹽水熱壓煮提2次。
5.按照權利要求1的制備方法，其特征是步驟2)中將濾液真空濃縮，攪拌下加入為濾液重量2～3倍的95％乙醇。
6.按照權利要求1的制備方法，其特征是步驟4)中將純凈稀藥液濃縮至骨原料投料重的0.5～0.8倍(V/W)。
7.按照權利要求6的制備方法，其特征是步驟4)中將純凈稀藥液濃縮至骨原料投料重的0.67倍(V/W)。
8.按照權利要求1的制備方法，其特征是步驟4)中將純凈稀藥液濃縮后，加壓過0.2um微孔濾膜。
9.一種骨肽注射液，其特征是由權利要求1～8任一所述方法制備得到的產品。
全文摘要
本發明公開了一種新的骨肽注射液制備方法及由該方法得到的產品，其制備方法如下1).將哺乳動物骨用鹽水熱壓煮提一次或多次，離心過濾，合并煮提液，在低溫下放置1～40小時，將提取液溫熱后離心過濾，收集濾液備用；2).將濾液真空濃縮后加入乙醇，靜置沉淀，吸出上層醇液，定容回收乙醇，得水提液；3).將水提液加等體積蒸餾水，依次通過弱酸性陽離子樹脂柱、弱堿性陰離子樹脂柱、珠狀殼聚糖柱和殼聚糖改性活性炭柱，去雜純化，得純凈稀藥液；4).將純凈稀藥液濃縮后，加壓過微孔濾膜，將濾液灌裝、熔封、熱壓滅菌，或將所得藥液通過冷凍干燥，得到凍干粉針劑。本發明骨肽注射液含有較高的骨肽成分，制備工藝簡捷，生產周期短。
文檔編號A61K35/32GK1698655SQ20051007691
公開日2005年11月23日 申請日期2005年6月9日 優先權日2005年6月9日
發明者趙紅梅 申請人:趙紅梅