專利名稱：朝天罐總黃酮提取工藝的制作方法
技術領域：
本發明屬于天然藥物的加工提取，特別是以植物朝天罐opiparaC.Y.Wu et C. Chen全株植物為原料的朝天罐總黃酮提取工藝。
背景技術：
朝天罐opipara C. Y. Wu et C. Chen),為野牡丹科金錦香屬多年生草本植物，分布于我國貴州、廣西、臺灣、長江流域各省及越南、泰國等國家，為廣西少數民族地區常用本草藥材[中國科學院植物志編輯委員會.中國植物志[M].北京科學出社，1984:238.]。主要以根入藥，又名罐子草根，其味甘、微苦，性平，歸腎、大腸經，功能益腎、止血、解毒，主治腰膝酸軟，咯血，痢疾，咽喉痛等；亦可全株入藥，用于小兒風熱、久咳、咯血、胃痛、白帶、月經不調、胎漏下血、痔瘡出血及癌癥等[廣西壯族自治區中醫藥研究所.廣西藥用植物名錄[M].南寧廣西人民出版社，1986: 164.]。朝天罐藥材資源豐富，我國中東部與西南各省均產，為民間常用的的中草藥之一。 至2012年7月30日，已公開的、與朝天罐有關的專利文獻共計4條，全部為發明專利，均為朝天罐的應用。朝天罐總黃酮和提取工藝，其中包括提取方法，提取溶劑、時間、次數和液料比、尚未見有專利文獻報道。

發明內容
本發明的目的是要提供一種高效且能放大進行工業生產的朝天罐總黃酮提取工藝。實現本發明目的的技術方案是
一種朝天罐總黃酮提取工藝，包括如下步驟
(1)將朝天罐藥材粉碎成粉末；
(2)將藥材粉末置于圓底燒瓶中，加入乙醇，用回流提取法提取；
(3)過濾，并用乙醇洗滌濾渣；
(4)合并過濾液和洗滌液，用乙醇定容后，得到含黃酮的溶液；
(5)顯色后測定吸光度，帶入回歸方程，計算出總黃酮含量。步驟(2)所述乙醇濃度為50、5% ;藥材粉末與乙醇的料液比(g:ml)=l:l(T30，提取時間f2h，提取次數廣3次。步驟(2)的優選參數為乙醇的濃度為75%，藥材粉末與乙醇的料液比(g:mL)=1:20，提取時間為lh，提取次數3次，這些均由具體實施方式
中的實驗得出。本發明的優點是本發明提供了一種朝天罐總黃酮的提取工藝，工藝條件簡單，可進行工業化生產。
具體實施例方式朝天罐總黃酮提取工藝1.儀器與試藥 1.1儀器
UV2550紫外分光光度計(日本島津公司)；B2200S-T型超聲儀(上海必能信超聲有限公司)；WF-4000C型常壓微波快速反應系統(上海屹堯分析儀器有限公司)；BT224S電子分析天平(北京賽多利斯儀器 系統有限公司)；單道微量可調移液槍(芬蘭ThermoFinnpipette) ；R-200 旋轉蒸發儀(瑞士 BUCHI 公司)。I. 2 試藥
蘆丁標準對照品(批號10080-9705，中國藥品生物制品檢定所)；乙醇(分析純，天津市大茂化學試劑廠，批號20080818);亞硝酸鈉(分析純，天津市博迪化工有限公司，批號20080904);硝酸鋁(分析純，天津市科密歐化學試劑有限公司，批號20080404);氫氧化鈉(分析純，重慶市川江化學試劑廠，批號20080822);甲醇(分析純，天津市博迪化工有限公司，批號:200807)；
水為超純水。其他均為分析純。朝天罐新鮮藥材購于桂林藥材市場，經桂林醫學院生藥學教研室杜澤鄉副教授鑒定為為野牡丹科植物朝天罐opipara C. Y. Wu et C. Chen的全株。取藥材根部陰干，粉碎，備用。2.方法與結果[3_5]
2.I測定波長的選擇
取適量對照品與朝天罐樣品溶液，分別置于5mL容量瓶中，加75%乙醇至I. 6mL,再加入
0.2mL亞硝酸鈉溶液(SOg*!/1)，搖勻，放置5min ;加入0. 2mL硝酸鋁溶液(lOOg^L—1)，搖勻，放置6min ;加入2mL氫氧化鈉溶液(40g*L_i),用蒸懼水定容至刻度,搖勻,放置15min顯色，立即測定；在200 800nm波長范圍內進行掃描，結果表明對照品與樣品溶液在505nm處均有最大吸收，故選擇505nm為測定波長。2. 2標準曲線的制作
精密稱定蘆丁對照品5. 17mg，置5mL量瓶中，加75%乙醇至刻度，搖勻，得濃度為1.034mg^mr1 的對照品溶液。取對照品溶液 0. 04mL, 0. 08mL, 0. 16mL, 0. 24mL, 0. 32mL, 0. 40mL,分別置5 mL量瓶中，按“2. I”項操作，自“加75%乙醇至，I. 6mL”起，依法測定吸光度，以吸光度(A)為縱坐標、濃度(C)為橫坐標繪制標準曲線。求得回歸方程為A=19. 79C+0. 0034(r=0. 9999)，線性范圍 0. 00827 0. 08272mg*mL'2. 3供試品溶液的制備
取朝天罐藥材粉末(60目)0. 2g，精密稱定，加入75%乙醇10mL，水浴回流提取I. 5h，重復2次。過濾，濾渣用75%乙醇洗滌，合并并濃縮濾液，置于IOmL容量瓶中，放冷，75%乙醇定容至刻度，搖勻，得供試品溶液。2. 4方法學考察
2.4. I穩定性考察
精密量取朝天罐供試品溶液0. 5mL，按“2. I”項操作，自“置5mL量瓶中”起，顯色后每隔5min測定一次吸光度，共6次，RSD=3. 09%，表明在測定時間30min內樣品穩定性良好。2. 4. 2精密度考察
取某一濃度對照品溶液0. 5mL,按“2. I”項操作，自“置5mL量瓶中”起，顯色后測定吸收度，連續6次，RSD=O. 18%。表明儀器精密度良好。2. 4. 3重現性考察
精密稱取同一批樣品6份，每份約0. 2g，按“2. 3”項下方法平行制備，每份取0. 5mL,按“2. I”操作顯色后，測定吸光度，帶入回歸方程，計算總黃酮含量平均含量1.90%，RSD二2. 33%。表明該方法重現性良好。2. 4. 4加樣回收率實驗
精密稱取已知含量的朝天罐粉末6份，每份約0. lg，均加入已知含量的蘆丁對照品l.Omg，按“2. 3”項下方法平行制備，每份取0.5mL，按“2. I”操作顯色后，測定各份樣品中吸光度，帶入回歸方程計算總黃酮的含量，計算得本法平均加樣回收率=98. 09%。RSD二
3.0%。見表I
表I樣品加樣回收率實驗(/7=6)
權利要求
1.朝天罐總黃酮提取工藝，其特征在于包括如下步驟 (1)將朝天罐藥材粉碎成粉末； (2)將藥材粉末置于圓底燒瓶中，加入乙醇，用回流提取法提取； (3)過濾，并用乙醇洗滌濾渣； (4)合并過濾液和洗滌液，用乙醇定容后，得到含黃酮的溶液； (5)顯色后測定吸光度，帶入回歸方程，計算出總黃酮含量。
2.根據權利要求I所述的提取工藝，其特征在于步驟(2)所述乙醇濃度為50、5%;藥材粉末與乙醇的料液比(g:ml)=l:l(T30，提取時間f2h，提取次數廣3次。
3.根據權利要求I或2所述的提取工藝，其特征在于步驟(2)所述乙醇濃度為75%，藥材粉末與乙醇的料液比(g:ml)=l:20，提取時間lh，提取次數3次。
全文摘要
本發明公開了一種朝天罐總黃酮提取工藝，采用如下方案取朝天罐藥材粉末置于圓底燒瓶中，用75%的乙醇回流提取；過濾，濾渣用提取液洗滌，合并濃縮濾液，用乙醇定容后，利用紫外分光光度計進行比色測定。該工藝條件簡單可行，為更有效的來發利用朝天罐資源提供了理論參考和實驗指導，可進行工業化生產。
文檔編號A61P11/04GK102772457SQ20121029095
公開日2012年11月14日 申請日期2012年8月16日 優先權日2012年8月16日
發明者張可鋒, 段小群, 高雅 申請人:桂林醫學院