專利名稱：鐵皮石斛在制備治療幽門螺桿菌感染的藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及鐵皮石斛的新的應用，尤其涉及鐵皮石斛在制備治療幽門螺桿菌感染的藥物中的應用。
背景技術：
慢性萎縮性胃炎(Chronic atrophic gastritis, CAG)是一種常見病，多發病，以胃黏膜上皮和腺體萎縮，黏膜變薄，黏膜下肌層增厚及腸化生、不典型性增生為特點，病程遷延，常反復發作，嚴重影響患者的工作和身心健康。更為重要的是，由于CAG腸化生和不典型性增生極易進一步發展成胃癌，因此，于1978年世界衛生組織(WHO)將CAG的胃黏膜萎縮、腸化生和不典型性增生列為胃癌的癌前病變。據統計，在我國CAG的發病率在7. 2% 以上，居各種胃病之首，發展成胃癌的占2%-8%。目前，全世界胃癌的發病率和死亡率居惡性腫瘤的第二位，居消化道腫瘤的第一位。所以，開發治療CAG藥物的研究，有效控制 CAG,不僅具有重大的社會意義，而且還具有重大的經濟價值。CAG病因復雜，現代醫學認為CAG與生物因素、理化因素、免疫因素以及遺傳因素密切相關。自1983年Warren和Masball首次從胃黏膜中分離幽門螺桿菌(Hp)以來，CAG 病因學得到快速發展。同時隨著分子生物學、電子胃鏡等新技術不斷在基礎和臨床研究中的廣泛應用，以及Hp研究的不斷深入，使得CAG病因病機研究和臨床治療手段等方面均有了較大進展。目前研究證明，Hp是CAG主要病因之一，其產生的尿素酶、過氧化物酶、蛋白水解酶、磷脂酶A對胃黏膜均有破壞作用。CagA基因型和VacA基因型Hp菌株還能分泌CagA 和VacA細胞毒素，二者均可導致胃黏膜細胞空泡樣變性壞死。而且二者還有很強的免疫原性，引起宿主產生抗體和宿主胃黏膜局部產生IL-1、IL-8等多種細胞因子，進而引起炎癥反應、黏膜損傷，最終導致黏膜萎縮。鑒此，控制Hp感染，根治Hp是當前治療CAG的重要手段。目前對于治療Hp感染方法有多種，抗生素治療占有重要地位，應用抗生素能很好地達到減輕臨床癥狀和胃黏膜修復的效果。近10年來，臨床研究證實，任何單一藥物都不能將 Hp根除，常常需要兩種以上藥物聯合治療。在聯合治療方案中，已經建立了標準劑量質子泵抑制劑(PPI)/枸櫞酸雷尼替丁(RBC) +兩中抗生素的一線治療方案和PPI+鉍劑+兩種抗生素的二線治療方案。隨著抗生素的廣泛應用，Hp耐藥菌株在不斷增加，臨床研究發現， 在用于控制Hp感染的抗生素中，甲硝唑耐藥菌株已高達80%，克拉霉素耐藥菌株也已接近 10%。近十年來，中醫從辨證、治則、方藥等方面對CAG進行了廣泛而卓有成效的研究。 中醫藥通過保護胃黏膜，改善胃黏膜血液循環，增強胃黏膜上皮細胞的再生和修復功能，提高患者的胃蛋白酶活性，改變胃內環境，促進幽門螺桿菌(HP)轉陰，然而，至目前，這類研究仍無突破性進展。因此，研究開發此類藥物有其重要臨床價值
發明內容
本發明要解決的問題是，克服現有技術中的不足，提供一種鐵皮石斛在制備治療幽門螺桿菌感染的藥物中的應用。為解決技術問題，本發明的解決方案是提供一種鐵皮石斛在制備治療幽門螺桿菌感染的藥物中的應用。本發明所述的藥物是摻有西洋參的鐵皮楓斗顆粒，該藥物通過下述方法制備獲得(1)將鐵皮石斛炮制為鐵皮楓斗后與西洋參備用，備用的鐵皮楓斗與西洋參重量比為 0. 67 1. 50 1 ；(2)將鐵皮楓斗用30倍溫水浸泡半小時后熱提取3次，每次提取8小時，每次提取后均將提取液離心、過濾，合并3次濾液得提取液；將提取液減壓濃縮為60 70°C下時相對密度為1. 00 1. 20的濃縮液，備用；(3)將西洋參用70%乙醇回流提取3次，每次3小時，合并提取液；減壓回收乙醇， 減壓濃縮為20 25°C下時相對密度為1. 00 1. 15的濃縮液，備用；(4)將上述鐵皮楓斗提取濃縮液和西洋參提取濃縮液合并、混勻，將葡萄糖置于沸騰床上，噴霧制粒，得到鐵皮楓斗顆粒；所述葡萄糖為輔料，其在鐵皮楓斗顆粒中的含量為藥學上可接受的輔料用量。與現有技術相比，本發明的有益效果是本發明提供了鐵皮石斛的一種用途，即用于制備鐵皮楓斗顆粒應用于治療HP感染中，為HP感染性慢性萎縮性胃炎的治療提供一種新手段。動物預實驗研究發現，本發明的鐵皮楓斗顆粒能明顯增加大鼠胃液量、總酸排出量與胃蛋白酶排出量，促進大鼠胃腸推進運動，軟化大便，但不增加濕糞數量，并有鎮痛作用。推測，鐵皮楓斗顆粒增加大鼠胃液量、總酸排出量與胃蛋白酶排出量這一作用，這不僅有利于能夠有效改善胃內微環境，抑制胃內HP生長，進而有效抑制HP分泌蛋白溶解酶、過氧化物酶、磷脂酶A、VagA細胞毒素、VacA空泡毒素，而且還有利于降低抗HP抗體的形成， 抑制HP抗體所造成的胃自身免疫性損傷。人體受試研究發現，鐵皮楓斗顆粒對慢性萎縮性胃炎有明顯的治療效果，對伴有 HP感染患者，促進HP轉陰，對HP轉陰率達62. 50%，療效顯著。
具體實施例方式石斛為蘭科植物，它分鐵皮、金釵、馬鞭、黃草、銅皮等幾十種。同為石斛，同科同屬但不同種，其藥效和市場價格也往往有著天壤之別。石斛中以鐵皮石斛最為稀有名貴，它因外表呈深綠色或鐵青色而得名，中藥界有“北有人參，南有楓斗”的說法。謗語稱“野山人參壯陽氣，像太陽；鐵皮石斛滋陰精，似月亮”。新鮮石斛不能久存，人們經整理、烘焙、加箍、干燥四個步驟將其炮制成螺旋狀的干品，即楓斗。鐵皮石斛(其幼莖粗壯、粘汁濃厚、纖維較少)加工后被稱為鐵皮楓斗。鐵皮楓斗的外觀飽滿、堅實，外表光亮、耐泡，由于鐵皮石斛多糖分子量較其它品種的石斛高得多，因而滋陰效果最佳，價格也最貴。實施例1鐵皮楓斗顆粒(P)的制備(1)按處方比例稱取鐵皮楓斗1670g，西洋參1330g，備用。(2)將鐵皮楓斗藥材用30倍溫水浸泡半小時，熱提取3次，每次提取8小時。每次提取后提取液離心、過濾，合并3次濾液，得提取液。提取液減壓濃縮，濃縮至相對密度為 1. 00-1. 20 (60-700C )的濃縮液，備用。(3)將西洋參置于多功能提取罐中，用70%乙醇回流提取3次，每次3小時，合并提取液，減壓回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.00-1. 15(20-25°c )濃縮液，備用。(4)將上述鐵皮楓斗提取濃縮液和西洋參提取濃縮液合并，混勻，將適量葡萄糖置于沸騰床上，噴霧制粒，制成IOOOg顆粒，即得。實施例2鐵皮楓斗顆粒(L)的制備(1)按處方比例稱取鐵皮楓斗1200g，西洋參1800g，備用。(2)將鐵皮楓斗藥材用30倍溫水浸泡半小時，熱提取3次，每次提取8小時。每次提取后提取液離心、過濾，合并3次濾液，得提取液。提取液減壓濃縮，濃縮至相對密度為 1. 00-1. 20 (60-700C )的濃縮液，備用。(3)將西洋參置于多功能提取罐中，用70%乙醇回流提取3次，每次3小時，合并提取液，減壓回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.00-1. 15(20-25°C )濃縮液，備用。(4)將上述鐵皮楓斗提取濃縮液和西洋參提取濃縮液合并，混勻，將適量葡萄糖置于沸騰床上，噴霧制粒，制成IOOOg顆粒，即得。實施例3鐵皮楓斗顆粒(H)的制備(1)按處方比例稱取鐵皮楓斗1800g，西洋參1200g，備用。(2)將鐵皮楓斗藥材用30倍溫水浸泡半小時，熱提取3次，每次提取8小時。每次提取后提取液離心、過濾，合并3次濾液，得提取液。提取液減壓濃縮，濃縮至相對密度為 1. 00-1. 20 (60-700C )的濃縮液，備用。(3)將西洋參置于多功能提取罐中，用70%乙醇回流提取3次，每次3小時，合并提取液，減壓回收乙醇，減壓濃縮至相對密度為1.00-1. 15(20-25°c )濃縮液，備用。(4)將上述鐵皮楓斗提取濃縮液和西洋參提取濃縮液合并，混勻，將適量葡萄糖置于沸騰床上，噴霧制粒，制成IOOOg顆粒，即得。以下通過試驗實施例證明本發明所述藥物鐵皮楓斗顆粒在治療幽門螺桿菌感染中的應用，這些實施例包括臨床前動物藥效學試驗和臨床療效觀察試驗。實驗例1鐵皮楓斗顆粒治療小鼠HP感染的實驗研究1、實驗樣品鐵皮楓斗顆粒(P)、鐵皮楓斗顆粒(L)、鐵皮楓斗顆粒(H)由浙江天皇藥業有限公司提供；麗珠胃三聯廣州麗珠公司產品。2、實驗動物=Wistar大鼠，上海史萊克動物中心提供。SSl螺桿菌菌株，國家疾控饋贈。3、實驗方法3. 1分組實驗用6周齡的雌雄各半Wistar大鼠120只，體重180_200g，隨機分正常對照組，模型組，鐵皮楓斗顆粒(P)高、中、低劑量組，鐵皮楓斗顆粒(L)組，鐵皮楓斗顆粒 (H)，麗珠胃三聯對照組，共8組，每組15只。3. 2造模除正常對照組外，每組大鼠禁食12小時，給予5. 0%的碳酸氫鈉2ml灌胃，10分鐘后給予從培養基上沖洗下來的HP菌液(1 X IO8Cfu) 1. 5ml灌胃，半小時后恢復飲食，每周感染1次，重復感染5次。3. 3給藥HP重復感染5次造模成功后，正常對照組和模型對照組均給予等體積的生理鹽水；鐵皮楓斗顆粒(P)高、中、低劑量組分別給予1. 2,0. 6,0. 3g生藥/kg的鐵皮楓斗顆粒；鐵皮楓斗顆粒(L)組給予0. 6g生藥/kg的鐵皮楓斗顆粒(L)；鐵皮楓斗顆粒(H)組給予0.6g生藥/kg的鐵皮楓斗顆粒(H)；麗珠胃三聯陽性對照組給予0.2g/kg麗珠胃三聯。 每組動物每天給藥1次，連續給藥4周。3. 4處理分析于最后1次給藥后，動物禁食過夜，乙醚麻醉處死。取出大鼠胃，然后用無菌生理鹽水沖洗胃內容物，收集沖洗液，離心，取上清液在微需氧條件下培養1周， 培養液涂片，在光學顯微鏡下觀察有無HP細菌生長；另從大鼠胃幽門環部位取5塊2 X 3mm 組織，勻漿后行尿素酶活力檢測；另沿胃大彎從賁門至胃竇剪5條條形組織，10%甲醛固定，石蠟包埋、切片，行HE染色，觀察粘膜炎癥情況。4、結果4. 1對HP生長的影響鐵皮楓斗顆粒灌胃4周后，取胃內容物按上述方法體外培養檢測；結果發現，與模型組比較，鐵皮楓斗顆粒處理各組HP陽性率明顯下降，其中，高劑量組與麗珠胃三聯陽性對照組接近，該結果與尿素酶檢測的結果基本一致，結果見表1。表1.鐵皮楓斗顆粒對HP生長情況的影響
HP陽性率(%)
組別動物數(只)培養法尿素酶法正常組150模型對照組1586.67%(13/15)80.00%(12/15)鐵皮楓斗顆粒(P)低劑量組(0. 3g/Kg)1553.33%(8/15)66.67%(10/15)鐵皮楓斗顆粒(P)中劑量組(0. 6g/Kg)1546. 67%(7/15)Φ60. 00%(9/15)鐵皮楓斗顆粒(P)高劑量組(1.2g/Kg)1540. 00% (6/15) Φ46.67 %(7/15) Φ鐵皮楓斗顆粒(L)組(0. 6g/Kg)1560. 00%(9/15)66. 67%(10/15)鐵皮楓斗顆粒(H)組(0. 6g/Kg)1546.67%(7/15)Φ53. 33%(8/15)Φ麗珠胃三聯組(0. 2g/Kg)1533. 33% (5/15)**40. 00% (6/15)**注*與模型組比較，ρ < 0. 05 與模型組比較，ρ < 0. 01。4. 2對胃炎模型炎癥的影響實驗結束后，將上述切片置于光學顯微鏡下，觀察并比較每組動物胃組織炎癥情況。炎癥情況檢查方法采用半定量法，即在低倍顯微鏡下觀察胃粘膜，然后在胃竇部取10 個視野，參照1994年美國休士頓胃炎診斷標準，按炎癥細胞浸潤程度分為0-3七個級別。具
6體分級方法為0級無炎癥；0. 5級鏡下觀察炎癥介于0與1之間；1級在胃小凹區或固有腺底部可見多個慢性炎癥細胞浸潤；1.5級鏡下觀察炎癥介于1-2之間；2級在胃小凹至粘膜肌層均有較多炎癥細胞浸潤；2. 5級鏡下觀察炎癥介于2與3之間；3級胃粘膜內可見成堆炎癥細胞集聚灶。研究證實，按照本法經5次HP反復感染后，模型組感染成功率達86. 67%，結果表明，采用本法建造HP感染模型方法可行；在此基礎上的研究發現，鐵皮楓斗顆粒各組經4周的治療，胃粘膜水腫、炎癥細胞浸潤情況均明顯改善，炎癥指數較模型組亦有不同程度的下降，結果如下表2。表2.鐵皮楓斗顆粒對大鼠HP感染性胃炎炎癥的影響
權利要求
1.鐵皮石斛在制備治療幽門螺桿菌感染的藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的鐵皮石斛在制備治療幽門螺桿菌感染的藥物中的應用，其特征在于，所述的藥物是摻有西洋參的鐵皮楓斗顆粒，該藥物通過下述方法制備獲得(1)將鐵皮石斛炮制為鐵皮楓斗后與西洋參備用，備用的鐵皮楓斗與西洋參重量比為 0. 67 1. 50 1 ；(2)將鐵皮楓斗用30倍溫水浸泡半小時后熱提取3次，每次提取8小時，每次提取后均將提取液離心、過濾，合并3次濾液得提取液；將提取液減壓濃縮為60 70°C下時相對密度為1. 00 1. 20的濃縮液，備用；(3)將西洋參用70%乙醇回流提取3次，每次3小時，合并提取液；減壓回收乙醇，減壓濃縮為20 25°C下時相對密度為1. 00 1. 15的濃縮液，備用；(4)將上述鐵皮楓斗提取濃縮液和西洋參提取濃縮液合并、混勻，將葡萄糖置于沸騰床上，噴霧制粒，得到鐵皮楓斗顆粒；所述葡萄糖為輔料，其在鐵皮楓斗顆粒中的含量為藥學上可接受的輔料用量。
全文摘要
本發明涉及鐵皮石斛的新用途，旨在提供鐵皮石斛在制備治療幽門螺桿菌感染的藥物中的應用。本發明揭示了鐵皮石斛在制備治療幽門螺桿菌感染的藥物中的應用，和基于鐵皮石斛在制備治療幽門螺桿菌感染的藥物的制備方法。本發明為幽門螺桿菌感染性慢性萎縮性胃炎的治療提供了一種新手段。本發明的鐵皮楓斗顆粒對慢性萎縮性胃炎有明顯的治療效果，對伴有HP感染患者，促進HP轉陰，對HP轉陰率達62.50％，療效顯著。
文檔編號A61K36/8984GK102327489SQ20111028243
公開日2012年1月25日 申請日期2011年9月21日 優先權日2011年9月21日
發明者吳人照, 夏克中, 張旭峰, 楊兵勛, 楊芳亮, 樓正家, 沈春香, 陳武兵, 陳立鉆 申請人:浙江天皇藥業有限公司